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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)

[求助] 为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型已有2人参与

图是我做的荧光定量PCR扩增曲线,两条线是一模一样的样品跑出来的,但是一个就是正常的S型曲线,一个就是倒S型的.我用的TaqMan探针.这样的结果出现很多次了,就是不知道问题出哪儿了,所以来求助了.

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保持平常心❤
1楼2013-04-10 19:51:29
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ybQuan

金虫 (著名写手)
★
yucuiyuan00(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-05-10 12:16:11
可能有原因有:
模板浓度不一样，而且样品浓度量偏大导致抑制反应，S曲线没有起来——将两个样品DNA浓度测一下，稀释到相同浓度。
体系配比不对，各成分没有充分混匀；加样后没有离心——保证加样成分准确，并在加完样后离心。
赞一下 回复此楼
哥在江湖漂，很少不挨刀，不是愿意挨，是哥很无奈!
10楼2013-04-12 10:53:23
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
木有人看吗
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保持平常心❤
2楼2013-04-10 20:50:25
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yiloutingyu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yucuiyuan00(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，鼓励应助，分子生物版块期待你的更多精彩。 2013-04-11 08:20:15
yucuiyuan00: 金币+2 2013-04-12 08:22:23
我做过一些，我认为主要是你的质粒的浓度不一样，你把质粒浓度稀释成相同拷贝数的试试。
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3楼2013-04-10 22:11:37
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yucuiyuan00

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by yiloutingyu at 2013-04-10 22:11:37
我做过一些，我认为主要是你的质粒的浓度不一样，你把质粒浓度稀释成相同拷贝数的试试。

是同一管稀释好的加样的啊
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保持平常心❤
4楼2013-04-11 08:47:27
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