| 查看: 1304 | 回复: 5 | |||||
[求助]
双向电泳的一些细节问题
|
|
各路大侠，走过路过不要错过。双向电泳博大精深，更多的是细节的把握，小弟初学双向电泳，再次抛砖引玉，望各路大侠解吾燃眉之急，也为后学者一个资料。 问题1：蛋白裂解液中的IPG buffer的pH与胶条的pH之间有没有严格的要求匹配？ps:我在两篇文献中看到胶条4-7的选择了3-10的buffer。 问题2：BIO-RAD的17cm的胶条的水化液上样量的范围是多少？ps:我之前上样量是360μl，但是很容易把水化液弄到电阻丝外或者胶的支撑面上。 问题3：第一向的电流在什么范围内算正常？ps:聚焦的时候，20μA/gel左右算正常吗？ 问题4：大家觉得这张图能用来分析吗？  电泳图.png |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 | 专业电子书 |
» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有218人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- blue native ，SDS0-PAGE双向电泳
已经有9人回复
- 双向电泳换IPG胶条横条纹严重
已经有10人回复
- 双向电泳IPG预制胶条
已经有3人回复
- （求助）蛋白质双向电泳胶显色后怎么会跑成这个样子。。。
已经有10人回复
- 请教各位大侠：双向电泳蛋白定量用bradford法的问题！！
已经有19人回复
- 双向电泳条纹等问题求助
已经有15人回复
- 跑植物叶片蛋白的双向电泳 需要点Mark吗 多大分子量的啊 还有 多大的胶条可以啊
已经有22人回复
- 双向电泳，等电聚焦后，胶条酸端，总是能看到白色蛋白，这该怎么解决啊 ？？？？
已经有6人回复
- RNAlater保存组织对双向电泳影响？
已经有3人回复
- Ebook__《双向电泳原理与方法》第三版
已经有281人回复
- 大家帮忙分析下双向电泳结果不好的原因（有图）
已经有11人回复
- 请教大家关于双向电泳的问题~
已经有4人回复
- 双向电泳，蛋白定量测定用方法的讨论
已经有14人回复
- 双向电泳图求助
已经有4人回复
- 双向电泳，刚提出来的总蛋白，在裂解液里可以4度放多久啊？
已经有12人回复
- 双向电泳提总蛋白，如何除盐啊？
已经有10人回复
- 双向电泳，1%溴酚蓝如何配的 啊？？
已经有6人回复
- 双向电泳，跑二向的时候，大家的电压或者电流都是怎样设置的 啊？？
已经有3人回复
- 求助：双向电泳仪的选择！
已经有3人回复
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
hc42: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-04-03 11:55:53
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-04 21:36:14
感谢参与，应助指数 +1
hc42: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-04-03 11:55:53
gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-04 21:36:14
|
1. IPG buffer的pH需要包括胶条的pH范围，其作用是辅助蛋白寻找其在胶条中正确的等电点位置。所以跑4-7的胶条用3-10的IPG buffer完全没有问题。 2. 我做BIO-RAD的17cm的胶条的时候一般是上样量为300μl。样品+水化液做330μl，超速离心后取300μl上样。 3. 电流在聚焦过程中是变动的，20算是正常吧。 4. 胶能否用于分析主要看分辨率和重复性。不知道你想分析多少点呢？ |
2楼2013-04-02 00:17:01
3楼2013-04-02 09:11:13
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2013-04-02 15:11:09
5楼2013-04-03 12:04:25
DBWJ
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 40 (小学生)
- 金币: 1871.9
- 散金: 13
- 红花: 5
- 帖子: 244
- 在线: 107.1小时
- 虫号: 2416640
- 注册: 2013-04-13
- 专业: 微生物生态学
6楼2013-05-21 08:50:36