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双向电泳的一些细节问题
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各路大侠，走过路过不要错过。双向电泳博大精深，更多的是细节的把握，小弟初学双向电泳，再次抛砖引玉，望各路大侠解吾燃眉之急，也为后学者一个资料。 问题1：蛋白裂解液中的IPG buffer的pH与胶条的pH之间有没有严格的要求匹配？ps:我在两篇文献中看到胶条4-7的选择了3-10的buffer。 问题2：BIO-RAD的17cm的胶条的水化液上样量的范围是多少？ps:我之前上样量是360μl，但是很容易把水化液弄到电阻丝外或者胶的支撑面上。 问题3：第一向的电流在什么范围内算正常？ps:聚焦的时候，20μA/gel左右算正常吗？ 问题4：大家觉得这张图能用来分析吗？  电泳图.png |
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cicelyzh
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【答案】应助回帖
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gyesang: 金币+2, 鼓励应助！ 2013-04-04 21:36:14
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1. IPG buffer的pH需要包括胶条的pH范围，其作用是辅助蛋白寻找其在胶条中正确的等电点位置。所以跑4-7的胶条用3-10的IPG buffer完全没有问题。 2. 我做BIO-RAD的17cm的胶条的时候一般是上样量为300μl。样品+水化液做330μl，超速离心后取300μl上样。 3. 电流在聚焦过程中是变动的，20算是正常吧。 4. 胶能否用于分析主要看分辨率和重复性。不知道你想分析多少点呢？ |
2楼2013-04-02 00:17:01
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cicelyzh
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