应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 质粒提取问题
101/1返回列表
查看: 1669  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

kueradi

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取问题

质粒p-EGFP-C3,DH5a菌。一直用碧云天的小量抽提质粒试剂盒，去年都挺好的，200-300ng/ul.今年再提就一直可低了，30-40ng/ul,运气好60-90ng/ul. A260/A280也不到1.7.买了新的盒子还是这样。质粒重新转化，抽提还是这样。大家有没有遇到过这种情况呀，什么原因呀呀。着急呀。
菌液都是过夜摇菌，12h. 每次4ml合一管提。沉积的菌量还合适着。操作都可注意了。急呀，什么原因呀。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-04-01 13:57:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得，不行就换试剂盒，不要因为试剂耽误实验。
赞一下 回复此楼
2楼2013-04-01 14:49:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
自己配药品，碱提，
或者换试剂盒
赞一下 回复此楼
3楼2013-04-01 15:01:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有用过试剂盒，都是用碱裂解法提，溶液自己配置；建议楼主：1）菌没有问题的情况下，根据说明书以及年前实验检查实验操作以及步骤，2）换家公司 试试
赞一下 回复此楼
4楼2013-04-01 15:07:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧歌ping

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流，节日愉快 2013-04-01 15:57:40
kueradi: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-10 10:16:21
一般试剂盒提质粒效果都很好的，还是以菌为主排除因素。首先，菌液过一两个月后不要直接摇菌，最好是划平板活化，挑取单克隆摇菌，菌的活性高。其次，以经验来说摇菌15个小时比较好，提取的质粒浓度能高。再次，你质粒重新转化所用的质粒浓度怎么样？一般质粒转化出来得菌都是很好的，检查下抗生素是否加的有点多，加多会影响菌的生长，摇菌提质粒结果不好。最后，实在不行就换试剂盒呗
赞一下 回复此楼
5楼2013-04-01 15:44:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
换试剂盒试试
或者菌不行了
赞一下 回复此楼
6楼2013-04-01 16:11:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

concon123456

铜虫 (小有名气)
换试剂
回复此楼
7楼2013-04-02 09:08:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

意孤城_

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先确认一下你这次提的质粒是不是低拷贝的  一般低拷贝的质粒提出来的效果就是很不理想 达不到300ng/ul（我们提的质粒基本上都大过这个值）
赞一下 回复此楼
8楼2013-04-02 09:51:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kueradi

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 牧歌ping at 2013-04-01 15:44:45
一般试剂盒提质粒效果都很好的，还是以菌为主排除因素。首先，菌液过一两个月后不要直接摇菌，最好是划平板活化，挑取单克隆摇菌，菌的活性高。其次，以经验来说摇菌15个小时比较好，提取的质粒浓度能高。再次，你质 ...

我的菌液摇12h,OD600就有可能到4了。15小时会不会菌液过了。我一般都是1:1000摇菌的。
目前换了试剂盒takara，还是这样。
质粒重新转化的时候，质粒浓度60ug/ml,因为提不到高的。
kana抗生素都是50ug/ml
赞一下 回复此楼
9楼2013-04-10 10:24:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

牧歌ping

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by kueradi at 2013-04-10 10:24:24
我的菌液摇12h,OD600就有可能到4了。15小时会不会菌液过了。我一般都是1:1000摇菌的。
目前换了试剂盒takara，还是这样。
质粒重新转化的时候，质粒浓度60ug/ml,因为提不到高的。
kana抗生素都是50ug/ml...

呃， 我们平时摇菌不测OD的，凭经验是15个小时好点。一般试剂盒提取质粒浓度都能达到500ng/ul-700ng/ul，取1ul转化，抗生素50mg/ml kana是10ml培养基里加20ul
赞一下 回复此楼
10楼2013-04-11 09:21:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 kueradi 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭