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kueradi

金虫 (小有名气)

[求助] 质粒提取问题

质粒p-EGFP-C3,DH5a菌。一直用碧云天的小量抽提质粒试剂盒,去年都挺好的,200-300ng/ul.今年再提就一直可低了,30-40ng/ul,运气好60-90ng/ul. A260/A280也不到1.7.买了新的盒子还是这样。质粒重新转化,抽提还是这样。大家有没有遇到过这种情况呀,什么原因呀呀。着急呀。
菌液都是过夜摇菌,12h. 每次4ml合一管提。沉积的菌量还合适着。操作都可注意了。急呀,什么原因呀。
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牧歌ping

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by kueradi at 2013-04-10 10:24:24
我的菌液摇12h,OD600就有可能到4了。15小时会不会菌液过了。我一般都是1:1000摇菌的。
目前换了试剂盒takara,还是这样。
质粒重新转化的时候,质粒浓度60ug/ml,因为提不到高的。
kana抗生素都是50ug/ml...

呃, 我们平时摇菌不测OD的,凭经验是15个小时好点。一般试剂盒提取质粒浓度都能达到500ng/ul-700ng/ul,取1ul转化,抗生素50mg/ml kana是10ml培养基里加20ul
10楼2013-04-11 09:21:59
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我觉得,不行就换试剂盒,不要因为试剂耽误实验。
2楼2013-04-01 14:49:42
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
自己配药品,碱提,
或者换试剂盒
3楼2013-04-01 15:01:08
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bingdong05

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有用过试剂盒,都是用碱裂解法提,溶液自己配置;建议楼主:1)菌没有问题的情况下,根据说明书以及年前实验检查实验操作以及步骤,2)换家公司 试试
4楼2013-04-01 15:07:36
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