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质粒提取问题
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质粒p-EGFP-C3,DH5a菌。一直用碧云天的小量抽提质粒试剂盒，去年都挺好的，200-300ng/ul.今年再提就一直可低了，30-40ng/ul,运气好60-90ng/ul. A260/A280也不到1.7.买了新的盒子还是这样。质粒重新转化，抽提还是这样。大家有没有遇到过这种情况呀，什么原因呀呀。着急呀。 菌液都是过夜摇菌，12h. 每次4ml合一管提。沉积的菌量还合适着。操作都可注意了。急呀，什么原因呀。 |
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【答案】应助回帖
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小丹木木: 金币+3, 鼓励交流，节日愉快 2013-04-01 15:57:40
kueradi: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-10 10:16:21
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kueradi: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-04-10 10:16:21
| 一般试剂盒提质粒效果都很好的，还是以菌为主排除因素。首先，菌液过一两个月后不要直接摇菌，最好是划平板活化，挑取单克隆摇菌，菌的活性高。其次，以经验来说摇菌15个小时比较好，提取的质粒浓度能高。再次，你质粒重新转化所用的质粒浓度怎么样？一般质粒转化出来得菌都是很好的，检查下抗生素是否加的有点多，加多会影响菌的生长，摇菌提质粒结果不好。最后，实在不行就换试剂盒呗 |
5楼2013-04-01 15:44:45
dshlove
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