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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » 色谱柱柱压异常高，尝试了多种办法，请教高人
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

[交流] 色谱柱柱压异常高，尝试了多种办法，请教高人

柱子型号：Jupiter C4 reversed phase column (250 mm × 4.6 mm, 300 -sized pores, 5-μm sized particles)
进样：植物蛋白粗提液，过0.45膜
流动相：70%水30%乙腈，结束试验后用100%乙腈冲洗
问题：用了两三天后，柱压奇高，达到220左右，用100%乙腈冲洗，柱压正常，在45-48之间
采取措施：超声筛板，无用；反相冲洗，无用；低流速5%甲醇冲洗两天后，采用流动相仍在190左右
所以，在此请高人指点，如果操作，为什么100%乙腈冲洗时正常，柱子真得堵了吗？
附件是我在网上搜集的液相色谱柱的清洗与再生方法，感谢大家，在此分享[ Last edited by hsd3521 on 2013-3-26 at 07:53 ]
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  • 附件 1 : 高效液相色谱柱清洗与再生方法.pdf
    • 2013-03-26 07:53:31, 966.76 K

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1楼 2013-03-24 09:06:25
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heyo_123

至尊木虫 (职业作家)
★
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-03-24 14:53:08
让我猜一下，没测过蛋白，但可能是如下原因：
1.你所分析的蛋白，在乙腈中溶解性好，但在水中，可能会析出，在你现在的色谱条件下，使用时间长，肯定会堵柱。
建议接一个保护柱。
测试你的样品的溶解性，溶于水吗？
柱压高？真是柱的原因吗？取下柱子，看看柱压。
再说低流速的甲醇水，5% 也有点太低了吧？虽然你的柱可以用水冲，但还是有机相比例高些好点吧...
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2楼2013-03-24 10:55:46
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普通回帖

hjcui

新虫 (初入文坛)
看不懂啊
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3楼2013-03-24 11:02:30
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huang19880

铜虫 (初入文坛)
可以一个个模块拆，排除看看是连上哪个模块压力大。如果柱温箱柱子前接口不连接，压力正常，连上柱子（柱后未连未连接检测器）压力就大了这样就是柱子问题了 。
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4楼2013-03-24 11:13:28
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sjzhang156

银虫 (著名写手)
乙腈压缩系数小，纯乙腈当然压力小了，你比前后的压力应该是一个流动相比列，100%水和100%乙腈差别当然大了
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5楼2013-03-24 14:52:04
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codyliu

铁杆木虫 (正式写手)
★
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-03-26 08:52:33
一般已经过了0.45的膜了就不应该是样品堵了柱子，但是如果用这个比例洗脱一直有问题的话可以考虑换一下比例，还有，我认为你检查一下是不是有人用它做过别的，他们是不是有残留，我就遇到过在检测池那里出现残留的问题，用水就导致压力增高，换成邮寄溶剂压力就会正常，另外，你的压力单位是什么？
还有，如果压力还在正常范围内就不要太担心，能用就行呗。
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6楼2013-03-24 15:06:47
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devsts

铜虫 (小有名气)
柱子倒过来装着冲下试试。
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7楼2013-03-24 16:41:21
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hsd3521

主管区长 (知名作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by heyo_123 at 2013-03-24 10:55:46
让我猜一下，没测过蛋白，但可能是如下原因：
1.你所分析的蛋白，在乙腈中溶解性好，但在水中，可能会析出，在你现在的色谱条件下，使用时间长，肯定会堵柱。
建议接一个保护柱。
测试你的样品的溶解性，溶于水吗 ...

感谢您的回复，我是豆类蛋白粗提液，基本全是水溶体系
取下柱子，就没柱压了，最高在5左右
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8楼2013-03-25 07:55:45
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hsd3521

主管区长 (知名作家)
引用回帖:
6楼: Originally posted by codyliu at 2013-03-24 15:06:47
一般已经过了0.45的膜了就不应该是样品堵了柱子，但是如果用这个比例洗脱一直有问题的话可以考虑换一下比例，还有，我认为你检查一下是不是有人用它做过别的，他们是不是有残留，我就遇到过在检测池那里出现残留的问 ...

谢谢您的回复
仪器安捷伦1100 到220的时候就容易出现蹦柱头的危险情况了
检测池应该没什么问题
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9楼2013-03-25 07:57:58
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hsd3521

主管区长 (知名作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by devsts at 2013-03-24 16:41:21
柱子倒过来装着冲下试试。

感谢回复，已倒冲过了，但是正用时问题依旧
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10楼2013-03-25 07:58:50
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hsd3521

主管区长 (知名作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by huang19880 at 2013-03-24 11:13:28
可以一个个模块拆，排除看看是连上哪个模块压力大。如果柱温箱柱子前接口不连接，压力正常，连上柱子（柱后未连未连接检测器）压力就大了这样就是柱子问题了 。

谢谢，用的时候出现过一次柱压过大，柱子连接头崩开的状况，压力骤降到5，所以基本可以推测是柱子问题了
并且别人用其他柱子的时候应该没有问题
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11楼2013-03-25 08:00:04
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zjp0900

金虫 (小有名气)
接了其他色谱柱试过没？ 如果其他色谱柱没问题，那么基本可以确定是色谱柱堵住了。
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12楼2013-03-25 09:09:40
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yulingzhu

木虫 (正式写手)
请问你是反冲是压力正常，而正向使用时压力很高吗？如果是这样的话是入口端的柱筛板堵了，我就遇到过类似的情况。
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13楼2013-03-25 21:40:06
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TrickyVick

金虫 (小有名气)
我说个最终方法，有点伤柱子：
用DMSO或DMF洗
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14楼2013-03-25 22:40:32
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bwshanxi

至尊木虫 (文坛精英)
怕是分子量有点大 柱子被堵
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15楼2013-03-25 23:17:29
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416301116

木虫 (正式写手)
你可以把样品过一次性滤膜在进样试一试
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16楼2013-03-26 07:55:07
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kaven186

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不知道反过来压力怎么样，如果反过来用压力没有问题。你可以尝试一直反过来用，看可不可以。
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17楼2013-03-26 09:28:58
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cxy20081015

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你流动相中有70%的水，在实验结束后直接用100%乙腈冲洗这个应该是柱子没冲洗干净。。建议你梯度冲洗。将乙腈的浓度逐渐提升至100%。另外实验结束后。使用流动相多走一段时间。最多你冲洗的时候把检测池先关掉。如果有升柱温的话，也请梯度降温
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18楼2013-03-27 11:15:24
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swallow13

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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19楼2013-03-27 11:42:37
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张鑫1982

至尊木虫 (文坛精英)
我遇到过。你分析的样品里肯定有物质不适合C4，不可逆的与填料结合了。
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20楼2013-03-27 19:50:46
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hsd3521

主管区长 (知名作家)
今天用了蛋白酶 柱压流动相时下降到了120 有点成效
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21楼2013-03-27 20:45:49
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swallow13

禁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
22楼2013-03-28 10:19:37
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质谱双鱼

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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20楼: Originally posted by 张鑫1982 at 2013-03-27 19:50:46
我遇到过。你分析的样品里肯定有物质不适合C4，不可逆的与填料结合了。

那你最后怎么处理的呢？还望告知！
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23楼2016-10-09 09:26:59
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质谱双鱼

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
20楼: Originally posted by 张鑫1982 at 2013-03-27 19:50:46
我遇到过。你分析的样品里肯定有物质不适合C4，不可逆的与填料结合了。

那你最后怎么处理的呢？还望告知！
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24楼2016-10-09 10:16:43
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