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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » c18色谱柱
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fishbao

金虫 (初入文坛)

[求助] c18色谱柱

,用95%水冲柱子柱压正常，可是用100%乙腈冲柱子时柱压很高，甚至比用95%水还高这是什么原因，应该怎么解决？
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123
1楼2012-05-23 20:50:31
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

求学小子

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-24 08:22:00
建议你先把柱子去掉，按照上述的比例跑一下，看一下这两种流动相的压力是否异常，一般来说C18柱应该是在有机溶剂时压力较少的，也有可能是缓冲盐问题，你可以先用大比例的水相过度到有机相，低流速长时间的洗一下，看看效果，祝你好运。
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fishbao
3楼2012-05-23 21:27:16
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hhw_123

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你先确定一下你的色谱柱原来做什么东西了，确定该物质溶于什么溶剂（甲醇或已经）。用80%甲醇水冲洗（看压力高不高）。如果不可行，可以将色谱柱以低流速（0.5以下）反冲一下。
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10楼2012-05-25 12:30:39
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tongliwoai

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2012-05-26 16:45:59
引用回帖:
2楼: Originally posted by masai100 at 2012-05-23 21:17:16
应该是有缓冲盐吧！最好先用纯水把柱子冲一下。

有缓冲盐这个是可能造成柱压高的原因
当然也有可能有些脏东西没冲出来
but，but，用纯水冲C18的柱子，这好像是不可取的吧。。。。。。
个人觉得水的比例80%-90%，搭配甲醇或者乙腈
仅供参考
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春有百花秋有月，夏有凉风冬有雪，若无闲事挂心头，便是人间好时节
12楼2012-05-26 15:26:29
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普通回帖

masai100

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-24 08:22:07
应该是有缓冲盐吧！最好先用纯水把柱子冲一下。
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fishbao
我能
2楼2012-05-23 21:17:16
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fishbao

金虫 (初入文坛)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by masai100 at 2012-05-23 21:17:16:
应该是有缓冲盐吧！最好先用纯水把柱子冲一下。

是的，我的流动相里面有缓冲盐，用纯水冲柱子会不会把柱子冲毁。谢谢
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123
4楼2012-05-24 09:55:24
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fishbao

金虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by 求学小子 at 2012-05-23 21:27:16:
建议你先把柱子去掉，按照上述的比例跑一下，看一下这两种流动相的压力是否异常，一般来说C18柱应该是在有机溶剂时压力较少的，也有可能是缓冲盐问题，你可以先用大比例的水相过度到有机相，低流速长时间的洗一下，

我用95%水冲柱子，柱压正常冲下来了，再用有机相冲柱子柱压就上去了，不过降低流速之后柱压在缓慢的降下来，这样冲可不可以呢？谢谢你的回复。
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123
5楼2012-05-24 09:57:07
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lhy86725

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 编辑内容 2012-05-29 14:51
95%的水长时间冲洗，冲洗完盐后，换有机冲洗污染物，压力上涨没事的，不要太在意250长5um的柱子，1.0的流速反压在20MPA以内问题都不大。色谱柱平时要靠维护，有盐用完一定要及时冲洗。

[ Last edited by 豆哥 on 2012-5-29 at 14:51 ]
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6楼2012-05-24 15:48:28
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zhuqiang922

木虫 (正式写手)
你的柱子型号是什么？95%水是黄色警戒线，一般色谱柱都用90%水冲。
关于有机相冲柱时柱压过大的问题，压力平稳吗？是稳定的柱压大，还是不稳定。
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7楼2012-05-25 08:45:11
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pejawj

铜虫 (初入文坛)
如果有缓冲盐的华清洗第一步一定用高比例水先冲！如果用高有机相，盐在柱子内就会析出，不仅是柱压高的问题还会损伤柱子。如果用到纯水缓冲盐的话可以选择各家色谱公司的这款柱子，比如Phenomenex的synergi系列走纯水效果都很好。
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8楼2012-05-25 09:23:18
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jasonwyb123

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
豆哥: 金币+1, 谢谢参与交流 2012-05-29 14:53:45
先用90%的水冲洗柱子吧，你换有机相之后柱压反而高了，说明你的盐析出了一部分，这样对柱子不好，你先purge几分钟，之后高水相冲洗到基线平衡，再换高有机相洗，到差不多时再用纯ACN去洗，保存柱子就好了，一般这样就没问题了，如果还是不行，柱子先卸掉，之后柱温调高，洗的差不多了，再加柱子，重复前面的过程
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9楼2012-05-25 10:44:08
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