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汕头大学海洋科学接受调剂
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hsd3521

主管区长 (知名作家)

[交流] 色谱柱柱压异常高，尝试了多种办法，请教高人

柱子型号：Jupiter C4 reversed phase column (250 mm × 4.6 mm, 300 -sized pores, 5-μm sized particles)
进样：植物蛋白粗提液，过0.45膜
流动相：70%水30%乙腈，结束试验后用100%乙腈冲洗
问题：用了两三天后，柱压奇高，达到220左右，用100%乙腈冲洗，柱压正常，在45-48之间
采取措施：超声筛板，无用；反相冲洗，无用；低流速5%甲醇冲洗两天后，采用流动相仍在190左右
所以，在此请高人指点，如果操作，为什么100%乙腈冲洗时正常，柱子真得堵了吗？
附件是我在网上搜集的液相色谱柱的清洗与再生方法，感谢大家，在此分享[ Last edited by hsd3521 on 2013-3-26 at 07:53 ]
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  • 附件 1 : 高效液相色谱柱清洗与再生方法.pdf
    • 2013-03-26 07:53:31, 966.76 K

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1楼 2013-03-24 09:06:25
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sjzhang156

银虫 (著名写手)
乙腈压缩系数小，纯乙腈当然压力小了，你比前后的压力应该是一个流动相比列，100%水和100%乙腈差别当然大了
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5楼2013-03-24 14:52:04
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heyo_123

至尊木虫 (职业作家)
★
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-03-24 14:53:08
让我猜一下，没测过蛋白，但可能是如下原因：
1.你所分析的蛋白，在乙腈中溶解性好，但在水中，可能会析出，在你现在的色谱条件下，使用时间长，肯定会堵柱。
建议接一个保护柱。
测试你的样品的溶解性，溶于水吗？
柱压高？真是柱的原因吗？取下柱子，看看柱压。
再说低流速的甲醇水，5% 也有点太低了吧？虽然你的柱可以用水冲，但还是有机相比例高些好点吧...
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2楼2013-03-24 10:55:46
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huang19880

铜虫 (初入文坛)
可以一个个模块拆，排除看看是连上哪个模块压力大。如果柱温箱柱子前接口不连接，压力正常，连上柱子（柱后未连未连接检测器）压力就大了这样就是柱子问题了 。
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4楼2013-03-24 11:13:28
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codyliu

铁杆木虫 (正式写手)
★
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-03-26 08:52:33
一般已经过了0.45的膜了就不应该是样品堵了柱子，但是如果用这个比例洗脱一直有问题的话可以考虑换一下比例，还有，我认为你检查一下是不是有人用它做过别的，他们是不是有残留，我就遇到过在检测池那里出现残留的问题，用水就导致压力增高，换成邮寄溶剂压力就会正常，另外，你的压力单位是什么？
还有，如果压力还在正常范围内就不要太担心，能用就行呗。
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6楼2013-03-24 15:06:47
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