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hsd3521

主管区长 (知名作家)

[交流] 色谱柱柱压异常高，尝试了多种办法，请教高人

柱子型号：Jupiter C4 reversed phase column (250 mm × 4.6 mm, 300 -sized pores, 5-μm sized particles)
进样：植物蛋白粗提液，过0.45膜
流动相：70%水30%乙腈，结束试验后用100%乙腈冲洗
问题：用了两三天后，柱压奇高，达到220左右，用100%乙腈冲洗，柱压正常，在45-48之间
采取措施：超声筛板，无用；反相冲洗，无用；低流速5%甲醇冲洗两天后，采用流动相仍在190左右
所以，在此请高人指点，如果操作，为什么100%乙腈冲洗时正常，柱子真得堵了吗？
附件是我在网上搜集的液相色谱柱的清洗与再生方法，感谢大家，在此分享[ Last edited by hsd3521 on 2013-3-26 at 07:53 ]

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附件 1 : 高效液相色谱柱清洗与再生方法.pdf

2013-03-26 07:53:31, 966.76 K

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1楼 2013-03-24 09:06:25

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hsd3521

主管区长 (知名作家)

引用回帖:

4楼: Originally posted by huang19880 at 2013-03-24 11:13:28
可以一个个模块拆，排除看看是连上哪个模块压力大。如果柱温箱柱子前接口不连接，压力正常，连上柱子（柱后未连未连接检测器）压力就大了这样就是柱子问题了。

谢谢，用的时候出现过一次柱压过大，柱子连接头崩开的状况，压力骤降到5，所以基本可以推测是柱子问题了
并且别人用其他柱子的时候应该没有问题

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11楼2013-03-25 08:00:04

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heyo_123

至尊木虫 (职业作家)

应助: 107 (高中生)
贵宾: 0.565
金币: 14642
帖子: 3244
在线: 1285.4小时
虫号: 810494

★
crity328: 金币+1, 感谢交流，欢迎常来~ 2013-03-24 14:53:08

让我猜一下，没测过蛋白，但可能是如下原因：
1.你所分析的蛋白，在乙腈中溶解性好，但在水中，可能会析出，在你现在的色谱条件下，使用时间长，肯定会堵柱。
建议接一个保护柱。
测试你的样品的溶解性，溶于水吗？
柱压高？真是柱的原因吗？取下柱子，看看柱压。
再说低流速的甲醇水，5% 也有点太低了吧？虽然你的柱可以用水冲，但还是有机相比例高些好点吧...