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汕头大学海洋科学接受调剂
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[交流] 色谱柱柱压异常高,尝试了多种办法,请教高人

柱子型号:Jupiter C4 reversed phase column (250 mm × 4.6 mm, 300 -sized pores, 5-μm sized particles)
进样:植物蛋白粗提液,过0.45膜
流动相:70%水30%乙腈,结束试验后用100%乙腈冲洗
问题:用了两三天后,柱压奇高,达到220左右,用100%乙腈冲洗,柱压正常,在45-48之间
采取措施:超声筛板,无用;反相冲洗,无用;低流速5%甲醇冲洗两天后,采用流动相仍在190左右
所以,在此请高人指点,如果操作,为什么100%乙腈冲洗时正常,柱子真得堵了吗?
附件是我在网上搜集的液相色谱柱的清洗与再生方法,感谢大家,在此分享[ Last edited by hsd3521 on 2013-3-26 at 07:53 ]
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  • 附件 1 : 高效液相色谱柱清洗与再生方法.pdf
  • 2013-03-26 07:53:31, 966.76 K

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引用回帖:
6楼: Originally posted by codyliu at 2013-03-24 15:06:47
一般已经过了0.45的膜了就不应该是样品堵了柱子,但是如果用这个比例洗脱一直有问题的话可以考虑换一下比例,还有,我认为你检查一下是不是有人用它做过别的,他们是不是有残留,我就遇到过在检测池那里出现残留的问 ...

谢谢您的回复
仪器安捷伦1100 到220的时候就容易出现蹦柱头的危险情况了
检测池应该没什么问题
9楼2013-03-25 07:57:58
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heyo_123

至尊木虫 (职业作家)



crity328: 金币+1, 感谢交流,欢迎常来~ 2013-03-24 14:53:08
让我猜一下,没测过蛋白,但可能是如下原因:
1.你所分析的蛋白,在乙腈中溶解性好,但在水中,可能会析出,在你现在的色谱条件下,使用时间长,肯定会堵柱。
建议接一个保护柱。
测试你的样品的溶解性,溶于水吗?
柱压高?真是柱的原因吗?取下柱子,看看柱压。
再说低流速的甲醇水,5% 也有点太低了吧?虽然你的柱可以用水冲,但还是有机相比例高些好点吧...
2楼2013-03-24 10:55:46
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huang19880

铜虫 (初入文坛)


可以一个个模块拆,排除看看是连上哪个模块压力大。如果柱温箱柱子前接口不连接,压力正常,连上柱子(柱后未连未连接检测器)压力就大了这样就是柱子问题了 。
4楼2013-03-24 11:13:28
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sjzhang156

银虫 (著名写手)


乙腈压缩系数小,纯乙腈当然压力小了,你比前后的压力应该是一个流动相比列,100%水和100%乙腈差别当然大了
5楼2013-03-24 14:52:04
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