应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 转化感受态后提取质粒，测浓度总是很低
51/1返回列表
查看: 6555  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hua_geduo

木虫 (正式写手)

[交流] 转化感受态后提取质粒，测浓度总是很低

年前做表达，目的片段连接到T载体上，然后转化，挑菌，摇菌，提取质粒，测质粒浓度总是很低；现在我的表达载体量不够了，想转化后提取，使量大一点，但是发现提取后测浓度又遇到同样的状况，请问这是怎么回事啊？用的感受态是DH5α，提质粒的试剂盒是爱思进的，实验卡在这里了，急求帮助！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2013-03-19 09:48:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)
★
hua_geduo(金币+1): 谢谢参与
表达载体比如pET系列， pGEX系列，提取质粒，浓度不高很正常啊，因为他们不是克隆载体，他们的启动子是严谨型启动子，要想获得大量质粒，你可以做中抽或大抽质粒，而且你转化表达菌株也不需要那么大的质粒浓度，只要转化表达菌株长出克隆出来就可以了
赞一下 回复此楼
8楼2013-03-19 12:25:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

xuchenxi121

新虫 (初入文坛)
★
hua_geduo(金币+1): 谢谢参与
通常不会是感受态的问题，而是提取质粒的问题，用试剂盒提取时很大可能会有质粒在柱子上洗脱不彻底的情况，因此建议可以将Elution加热后再洗脱，可显著提高得率。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-19 10:23:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉米头

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
hua_geduo(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 鼓励来分子生物版块发贴交流！ 2013-03-19 12:22:49
我也遇到过这种情况，质粒得率低，做了好多次都是这样，你可以换成JM109的，我试过，效果很好。这可能是DH5a不大适合T载体的扩增。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-03-19 10:31:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxxuan

金虫 (著名写手)
★ ★ ★
hua_geduo(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+2, 很好的建议，鼓励交流哈！ 2013-03-19 12:26:44
是先划板活化后再挑菌放大摇菌是吗？
我以前用DH5a做宿主培养提取质粒也没问题的。
会不会是你的质粒拷贝数比较低？试着用低拷贝的质粒抽提试剂盒看看会不会好一些？
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-19 10:52:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭