| 查看: 1275 | 回复: 5 | |||
[求助]
rt-qPCR(one step)标曲问题
|
|
大家好，还是rt-qpcr的问题，之前来发过一次贴，详见http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=5474355。但是到现在还没解决，处于极度不知道怎么办的状态。还请各位高手指点一二。问题如下： 标曲RNA样品(最高total RNA浓度约为90ng/uL，10倍数量级稀释5个梯度)，之前一切正常（同样的方法同一批标样至少使用了一年以上），前段时间突然开始最低那个浓度梯度不能扩增，后来迅速发展为倒数第二个也不能扩增，标曲只剩下了3个点，现在第三个浓度低度开始扩增的循环数也推后了……以为是RNA降解了，于是重新制作了标样，可最低两个浓度还是不能正确有效扩增。 于是又考虑probe，primer，RNase free water污染等原因，全部使用了新的，结果还是一样。然后又用了新kit，全部使用了带滤膜的枪头，可还是一样。 后来又考虑到是不是这一批kit的酶有问题，但是奇怪的是同一个标样，同样的稀释方法，其他的功能基因片段可以正确扩增。而一直不能扩增的是当做参考基因β-actin啊~~~~ 另外，还想询问下是不是被Rnase污染的可能？目前最高两个浓度开始扩增和达到plateau的循环数同没出现问题一样，污染了话，可能出现这样的情况吗？ 还请明白人指点一下那里可能出了问题。 kit: platimum quantitative rt-pcr thermoscript one-step system (invitrogen) |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有158人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- rt-qpcr标准曲线问题
已经有10人回复
- QPCR 溶解曲线
已经有9人回复
- qPCR的标准曲线成线性很差，扩增效率低，是什么原因
已经有6人回复
- 紧急求助！我的RT-PCR数据怎么做成可以发文章的图？
已经有26人回复
- 关于荧光定量的问题
已经有8人回复
- 有关RT-PCR中的一些困扰的问题
已经有7人回复
- 内标法做标准曲线的问题
已经有8人回复
- RT-qPCR实验问题
已经有23人回复
- 原子吸收 标准曲线问题
已经有12人回复
- 着急！RT-PCR扩增效率低，情况很诡异，求助高手帮忙指点
已经有12人回复
- 关于qPCR的几个问题，求解答
已经有3人回复
- ICP-MS测铅-标准曲线的问题？
已经有13人回复
- IQ5 RT-QPCR问题求助
已经有8人回复
- 一个关于qPCR标准曲线的问题。谢谢！
已经有12人回复
- CO2/CO标准曲线制作问题
已经有6人回复
- 有关TP和TN的标曲问题
已经有12人回复
- 请教ICP标准曲线的问题
已经有4人回复
- 想问一下关于rt-qPCR的问题
已经有4人回复
- 【求助】请教：液相 标准曲线问题？
已经有6人回复
- 【讨论】液相色谱绘制标准曲线的问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】RNA的提取问题和qRT-PCR分析基因在不同时间的定量表达
已经有10人回复
gyesang
荣誉版主 (著名写手)
-
专家经验: +24 - MolEPI: 31
- 应助: 599 (博士)
- 贵宾: 2.689
- 金币: 24334.9
- 散金: 1088
- 红花: 88
- 沙发: 2
- 帖子: 2327
- 在线: 623.1小时
- 虫号: 849017
- 注册: 2009-09-16
- 性别: GG
- 专业: 细胞信号转导
- 管辖: 分子生物
2楼2013-03-07 17:21:07
3楼2013-03-08 09:42:33
foreverlukel
新虫 (初入文坛)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 65.5
- 红花: 2
- 帖子: 30
- 在线: 9.3小时
- 虫号: 2403299
- 注册: 2013-04-06
- 专业: 免疫生物学
4楼2013-04-16 16:37:45
5楼2013-04-18 12:40:39
6楼2013-05-10 13:04:08