24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3303  |  回复: 23

liusiapril

木虫 (小有名气)

[求助] WB没有条带啊

今天做了一次WB。用的蛋白和抗体在此之前试着做过一次DOT BLOT,把抗体的使用条件都摸索了一遍,且取得了较好的结果。但是相同的抗体和蛋白一起来做WB,显影时一条条带也看不到。蛋白上样量比以前还增加了。我在想是转膜的问题吗?我的目的条带最大100kD,最小17kD,0.45的膜湿转,100mA,2小时。求助经验人士给予指导,谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 08:37:17
如果怀疑是转膜的问题,可以跑预染的marker,看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。
2楼2013-03-06 07:33:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:33:04
如果怀疑是转膜的问题,可以跑预染的marker,看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。

膜上有72和95两条带,小带有部分在滤纸上有印记。但是大的那个条带在膜上也没有出现,今天试着用丽春红染色看看。
3楼2013-03-06 08:38:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 10:45:32
确定用的膜对了,然后转膜时不要有气泡,抗体孵育的时候不要错了
4楼2013-03-06 09:36:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zx1984 at 2013-03-06 09:36:16
确定用的膜对了,然后转膜时不要有气泡,抗体孵育的时候不要错了

膜对,转膜时也保证没有气泡,抗体孵育是一抗4℃过夜二抗室温40分钟,都是以前摸索好的条件啊。。。
5楼2013-03-06 10:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:33:04
如果怀疑是转膜的问题,可以跑预染的marker,看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。

还想再请教一下,丽春红是不是只能用于转膜后未封闭前的膜染色,我一套流程走下来曝光后发现没有条带再染,似乎没有效果啊,染不上的感觉。。。
6楼2013-03-06 10:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:33:04
如果怀疑是转膜的问题,可以跑预染的marker,看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。

还想请教一下,丽春红染色是不是只针对于转膜后封闭前的膜,我这一张曝光后未见条带的膜用丽春红染色后没有效果,什么也没有染上。配方是0.1g丽春红,5ml乙酸,定容至100ml。谢谢
7楼2013-03-06 10:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 12:15:44
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-07 08:05:17
你这个显然是转膜不好, PVDF膜需要用甲醇先活化的,看看'分子克隆指南'上的介绍
有朋自网上来不亦乐乎
8楼2013-03-06 11:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)

转膜时也有注意避免有气泡的,膜的活化和平衡也处理了,还有什么原因可能导致转膜出问题吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
9楼2013-03-06 12:15:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


silicare: 金币+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-03-08 09:47:15
wizardfan: 管理失误,一般一个帖子只产生一个应助指数 2013-03-09 06:59:46
引用回帖:
9楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-06 12:15:22
转膜时也有注意避免有气泡的,膜的活化和平衡也处理了,还有什么原因可能导致转膜出问题吗?

如果你再想不到有问题,就再作一次,good luck,其实有时候, 一些小问题,根本就注意不到,比方电极反了, 或者膜和胶哪个先放,哪个后放,这你可能都知道,但做的时候,一不小心错了,,再认真做一次
有朋自网上来不亦乐乎
10楼2013-03-06 12:49:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liusiapril 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料学硕333求调剂 +10 北道巷 2026-03-24 10/500 2026-03-28 23:06 by 无际的草原
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分,求调剂 +5 0857求调剂. 2026-03-24 6/300 2026-03-28 22:04 by zhq0425
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 5/250 2026-03-28 21:26 by zhq0425
[考研] 0703 化学 求调剂,一志愿山东大学 342 分 +3 Shern—- 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:24 by 唐沐儿
[考研] 求调剂一志愿海大,0703化学学硕304分,有大创项目,四级已过 +7 幸运哩哩 2026-03-22 11/550 2026-03-28 20:27 by 唐沐儿
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利|求调剂 +7 Micky11223 2026-03-25 7/350 2026-03-28 18:34 by 无际的草原
[考研] 320分,材料与化工专业,求调剂 +9 一定上岸aaa 2026-03-27 13/650 2026-03-28 15:00 by 神马都不懂
[考研] 311求调剂 +3 希望上岸阿小杨 2026-03-23 3/150 2026-03-28 07:57 by 热情沙漠
[考研] 07化学280分求调剂 +10 722865 2026-03-23 10/500 2026-03-27 15:51 by Plutoqq
[考研] 316求调剂 +5 Pigcasso 2026-03-24 5/250 2026-03-27 12:10 by zhshch
[考研] 一志愿吉大071010,316分求调剂 +3 xgbiknn 2026-03-27 3/150 2026-03-27 10:36 by guoweigw
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 求调剂,一志愿 南京航空航天大学大学 ,080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-26 5/250 2026-03-27 08:10 by hypershenger
[考研] 329求调剂 +7 钮恩雪 2026-03-25 7/350 2026-03-27 04:28 by wxiongid
[考研] 329求调剂 +5 1() 2026-03-22 5/250 2026-03-26 20:40 by fmesaito
[考研] 289求调剂 +17 硕星赴 2026-03-23 17/850 2026-03-26 16:18 by 不吃魚的貓
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 085404电子信息284分求调剂 +4 13659058978 2026-03-24 4/200 2026-03-24 12:15 by syl20081243
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
信息提示
请填处理意见