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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
20楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-08 22:19:32
嗯,我的蛋白是天然提取物中获得的,没法纯化,就想通过WB让他们显现出来,方便判断浓度大小。这样看来的话,我的样品上样量很是问题。以前提取这个蛋白,没测浓度前做过一次,那时上了10微升的原液,条带很浓…
...

你不是说做过dot blot吗?那时你点了多少蛋白?此外,你用的抗体的特异性怎么样?如果特异性差的抗体dot blot的结果不怎么可信。
21楼2013-03-09 01:27:02
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liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-09 01:27:02
你不是说做过dot blot吗?那时你点了多少蛋白?此外,你用的抗体的特异性怎么样?如果特异性差的抗体dot blot的结果不怎么可信。...

嗯,我和老师讨论后的结果也是把重点放在WB上。Dot blot当时只上了5微克的蛋白,虽然曝光很淡,但是能看到。当时想着WB把蛋白都分开了,可能单独一条带出来就真的会弱点呢,毕竟Dot blot时各种蛋白都混一起了。。经过多次摸索实验,我觉得一抗特异性可能不是很好。但是因为蛋白特殊性,也没别的抗体可选择…

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22楼2013-03-09 23:57:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
22楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-09 23:57:58
嗯,我和老师讨论后的结果也是把重点放在WB上。Dot blot当时只上了5微克的蛋白,虽然曝光很淡,但是能看到。当时想着WB把蛋白都分开了,可能单独一条带出来就真的会弱点呢,毕竟Dot blot时各种蛋白都混一起了。。经 ...

用的是多克隆抗体吗?建议你多上些样品。能做出来后在调整抗体稀释比例或者上样量。
23楼2013-03-10 03:59:43
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liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
23楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-10 03:59:43
用的是多克隆抗体吗?建议你多上些样品。能做出来后在调整抗体稀释比例或者上样量。...

嗯,我再改动条件试试,希望以后还能交流学习,谢谢~

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
24楼2013-03-10 10:19:38
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