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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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liusiapril

木虫 (小有名气)

[求助] WB没有条带啊

今天做了一次WB。用的蛋白和抗体在此之前试着做过一次DOT BLOT,把抗体的使用条件都摸索了一遍,且取得了较好的结果。但是相同的抗体和蛋白一起来做WB,显影时一条条带也看不到。蛋白上样量比以前还增加了。我在想是转膜的问题吗?我的目的条带最大100kD,最小17kD,0.45的膜湿转,100mA,2小时。求助经验人士给予指导,谢谢
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liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
21楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-09 01:27:02
你不是说做过dot blot吗?那时你点了多少蛋白?此外,你用的抗体的特异性怎么样?如果特异性差的抗体dot blot的结果不怎么可信。...

嗯,我和老师讨论后的结果也是把重点放在WB上。Dot blot当时只上了5微克的蛋白,虽然曝光很淡,但是能看到。当时想着WB把蛋白都分开了,可能单独一条带出来就真的会弱点呢,毕竟Dot blot时各种蛋白都混一起了。。经过多次摸索实验,我觉得一抗特异性可能不是很好。但是因为蛋白特殊性,也没别的抗体可选择…

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
22楼2013-03-09 23:57:58
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 08:37:17
如果怀疑是转膜的问题,可以跑预染的marker,看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。
2楼2013-03-06 07:33:04
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liusiapril

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:33:04
如果怀疑是转膜的问题,可以跑预染的marker,看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。

膜上有72和95两条带,小带有部分在滤纸上有印记。但是大的那个条带在膜上也没有出现,今天试着用丽春红染色看看。
3楼2013-03-06 08:38:29
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zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 10:45:32
确定用的膜对了,然后转膜时不要有气泡,抗体孵育的时候不要错了
4楼2013-03-06 09:36:16
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