10楼: Originally posted by neuralcrest at 2013-03-06 12:49:33
如果你再想不到有问题,就再作一次,good luck,其实有时候, 一些小问题,根本就注意不到,比方电极反了, 或者膜和胶哪个先放,哪个后放,这你可能都知道,但做的时候,一不小心错了,,再认真做一次...

7楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-06 10:53:52
还想请教一下，丽春红染色是不是只针对于转膜后封闭前的膜，我这一张曝光后未见条带的膜用丽春红染色后没有效果，什么也没有染上。配方是0.1g丽春红，5ml乙酸，定容至100ml。谢谢...

3楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-06 08:38:29
膜上有72和95两条带，小带有部分在滤纸上有印记。但是大的那个条带在膜上也没有出现，今天试着用丽春红染色看看。...

12楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-07 10:06:30
这个染液的配方是可以的。你上样量是多少μg蛋白？丽春红染色不是特别灵敏，一般可以染出丰度较高的蛋白条带。...

14楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-07 18:42:07
总蛋白浓度是10微克，今天试了一下转膜后染色，没染上啊，可能真是量不大。转过的胶一直都有染色，除了最顶端较大的条带，别的都没有了。没有再跑胶单染…样品较难获得，怕浪费了…
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15楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-08 06:29:56
10 μg蛋白的确不算多，李春红染不出来也是有可能的。一般是要把胶染一下看是否是跑胶的问题的。样品实在难得也没办法了。你的目标蛋白多大？不是太小的话一般不会转过。你前面提到的转膜电流什么的，你是湿法还是 ...

16楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-08 08:07:14
我的条带大小差距比较多，大的100，小的17，我都是湿转的，一般恒流100mA，转两小时。用的0.45的膜，感觉小的marker带都不是很清晰…0.22的膜我总觉得背景好高
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17楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-08 11:11:35
不是特别小的蛋白不用0.22的膜，通常用0.45的就很好了。我觉得我湿转都是400mA 1.5-2小时的。不知道你的转膜电流是不是有点小。...

18楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-08 13:11:21
那请问你的胶是多大浓度？电流的问题我考虑改动一下，昨天15%的胶转膜，100mA，2h，貌似大条带不是很好呢。还想请教下你们蛋白上样的问题，是上样液里只有目的蛋白还是也有其他蛋白，我觉得自己的上样可能真的有点 ...

19楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-08 15:29:34
我一般跑12-20%的梯度胶，有时候也跑12%或者15%的胶。
上的样品有纯化的蛋白，也有蛋白粗提液。就染色而言，一般如果是纯化的样品，不需要上很多，考染1-5μg足够染出很好的带，如果是未纯化的蛋白，上30-50μg。 ...