24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (3350)
>文献求助 (354)
>虫友互识 (260)
>导师招生 (208)
>考博 (136)
>论文投稿 (111)
>基金申请 (102)
>硕博家园 (75)
>博后之家 (71)
>招聘信息布告栏 (66)
>公派出国 (58)
>休闲灌水 (57)
>找工作 (54)
>考研 (42)
>教师之家 (38)
>高分子 (24)

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 2878.2
帖子: 138
在线: 43.9小时
虫号: 1343529
注册: 2011-07-12
性别: MM
专业: 疫苗学

[求助] WB没有条带啊

今天做了一次WB。用的蛋白和抗体在此之前试着做过一次DOT BLOT，把抗体的使用条件都摸索了一遍，且取得了较好的结果。但是相同的抗体和蛋白一起来做WB，显影时一条条带也看不到。蛋白上样量比以前还增加了。我在想是转膜的问题吗？我的目的条带最大100kD，最小17kD,0.45的膜湿转，100mA,2小时。求助经验人士给予指导，谢谢

回复此楼

» 猜你喜欢

1楼 2013-03-05 21:09:55

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

BioEPI: 4
应助: 1662 (讲师)
金币: 8693.8
红花: 72
帖子: 3516
在线: 456小时
虫号: 1614001
注册: 2012-02-13
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

引用回帖:

14楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-07 18:42:07
总蛋白浓度是10微克，今天试了一下转膜后染色，没染上啊，可能真是量不大。转过的胶一直都有染色，除了最顶端较大的条带，别的都没有了。没有再跑胶单染…样品较难获得，怕浪费了…
...

10 μg蛋白的确不算多，李春红染不出来也是有可能的。一般是要把胶染一下看是否是跑胶的问题的。样品实在难得也没办法了。你的目标蛋白多大？不是太小的话一般不会转过。你前面提到的转膜电流什么的，你是湿法还是半干法？