应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » WB没有条带啊
241/3返回列表123下一页
查看: 3575  |  回复: 23
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

liusiapril

木虫 (小有名气)

[求助] WB没有条带啊

今天做了一次WB。用的蛋白和抗体在此之前试着做过一次DOT BLOT，把抗体的使用条件都摸索了一遍，且取得了较好的结果。但是相同的抗体和蛋白一起来做WB，显影时一条条带也看不到。蛋白上样量比以前还增加了。我在想是转膜的问题吗？我的目的条带最大100kD，最小17kD,0.45的膜湿转，100mA,2小时。求助经验人士给予指导，谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-05 21:09:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 08:37:17
如果怀疑是转膜的问题，可以跑预染的marker，看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-06 07:33:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:33:04
如果怀疑是转膜的问题，可以跑预染的marker，看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。

膜上有72和95两条带，小带有部分在滤纸上有印记。但是大的那个条带在膜上也没有出现，今天试着用丽春红染色看看。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-06 08:38:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zx1984

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 10:45:32
确定用的膜对了，然后转膜时不要有气泡，抗体孵育的时候不要错了
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-06 09:36:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zx1984 at 2013-03-06 09:36:16
确定用的膜对了，然后转膜时不要有气泡，抗体孵育的时候不要错了

膜对，转膜时也保证没有气泡，抗体孵育是一抗4℃过夜二抗室温40分钟，都是以前摸索好的条件啊。。。
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-06 10:45:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:33:04
如果怀疑是转膜的问题，可以跑预染的marker，看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。

还想再请教一下，丽春红是不是只能用于转膜后未封闭前的膜染色，我一套流程走下来曝光后发现没有条带再染，似乎没有效果啊，染不上的感觉。。。
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-06 10:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-06 07:33:04
如果怀疑是转膜的问题，可以跑预染的marker，看看marker转的情况。或者转完膜后用丽春红染一下膜看看。

还想请教一下，丽春红染色是不是只针对于转膜后封闭前的膜，我这一张曝光后未见条带的膜用丽春红染色后没有效果，什么也没有染上。配方是0.1g丽春红，5ml乙酸，定容至100ml。谢谢
赞一下 回复此楼
7楼2013-03-06 10:53:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
liusiapril: 金币+1 2013-03-06 12:15:44
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2013-03-07 08:05:17
你这个显然是转膜不好, PVDF膜需要用甲醇先活化的,看看'分子克隆指南'上的介绍
赞一下 回复此楼
有朋自网上来不亦乐乎
8楼2013-03-06 11:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

liusiapril

木虫 (小有名气)
转膜时也有注意避免有气泡的，膜的活化和平衡也处理了，还有什么原因可能导致转膜出问题吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
9楼2013-03-06 12:15:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

neuralcrest

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
silicare: 金币+1, 应助指数+1, 谢谢参与 2013-03-08 09:47:15
wizardfan: 管理失误，一般一个帖子只产生一个应助指数 2013-03-09 06:59:46
引用回帖:
9楼: Originally posted by liusiapril at 2013-03-06 12:15:22
转膜时也有注意避免有气泡的，膜的活化和平衡也处理了，还有什么原因可能导致转膜出问题吗？

如果你再想不到有问题,就再作一次,good luck,其实有时候, 一些小问题,根本就注意不到,比方电极反了, 或者膜和胶哪个先放,哪个后放,这你可能都知道,但做的时候,一不小心错了,,再认真做一次
赞一下 回复此楼
有朋自网上来不亦乐乎
10楼2013-03-06 12:49:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 liusiapril 的主题更新
241/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-06 07:55 by GBJlw5zzHWpZ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-05 8/400 2026-11-06 05:44 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[基金申请] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:43 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 12/600 2026-11-06 05:32 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 9/450 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 05:21 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 11/550 2026-11-06 05:15 by Equinoxhua
[考研] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:11 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 kvewwGtKktqB 2026-11-04 14/700 2026-11-06 05:10 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 14/700 2026-11-06 04:58 by qL1cU46YIdK0
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 13/650 2026-11-06 04:49 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 22/1100 2026-11-06 04:47 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 8/400 2026-11-06 02:24 by qL1cU46YIdK0
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ELBZ6WwEaRj6 2026-11-04 9/450 2026-11-06 02:15 by qL1cU46YIdK0
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 7/350 2026-11-06 02:13 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 10/500 2026-11-06 01:40 by qL1cU46YIdK0
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 ncTVBM6AOJHF 2026-11-04 12/600 2026-11-05 11:10 by PYZmcHr5kSaq
[基金申请] 各位基础老师们，看完中央《从严治党》的决定后，对学术界更加有信心了吧 +5 iaeyuan 2026-11-01 5/250 2026-11-04 14:43 by jinchengzi
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭