24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4853  |  回复: 18
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物再次PCR无条带 只有弥散

如图所示,左边是两道marker(DL2000和wide range),前四个样是一次PCR的产物,目的大小是3K,总见不着带。然后就把PCR产物稀释1000倍,进行再次PCR,就出现了大片段的弥散,就是图中后四个样。一开始以为稀释倍数不够,还试过10000倍和100000倍,结果类似,弥散稍微弱一些,但是集中的条带还是很大。求高人指点,这到底为啥啊???如何改进,才能获得清晰的单带啊?

20130227.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇之天下

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Hopig at 2013-03-01 21:07:34
怎么检测PCR模板?您是指哪一步的模板啊?谢谢~...

您的第一次PCR产物是通过,RT-PCR获得的吗?如果是,电泳检测下RNA的完整性。
左边一次PCR产物特异性太差了,直接弥散了,估计可能是模板RNA或者引物设计的问题。
最好详细说下你的实验过程。希望对你有帮助吧!
修行人
6楼2013-03-02 12:26:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
试试提高退火温度,降低引物浓度,加入DMSO等方法。前两者或者能解决问题。
2楼2013-03-01 12:52:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇之天下

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
第一,检测PCR模板;第二,提高退火温度以增加特异性;第三,梯度稀释,同时设阴性和阳性对照。
修行人
3楼2013-03-01 12:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2013-03-01 12:52:56
试试提高退火温度,降低引物浓度,加入DMSO等方法。前两者或者能解决问题。

这就做上试试~谢!
4楼2013-03-01 21:06:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 297,工科调剂? +3 河南农业大学-能 2026-04-14 3/150 2026-04-15 22:02 by noqvsozv
[考研] 296求调剂 +12 汪!?! 2026-04-09 13/650 2026-04-15 20:01 by 学员JpLReM
[考研] 化工学硕294分,求导师收留 +32 yzyzx 2026-04-12 36/1800 2026-04-14 17:45 by lhj2009
[考研] 一志愿中南大学 0855 机械 286 求调剂 +11 不会吃肉 2026-04-12 11/550 2026-04-13 21:59 by bljnqdcc
[考研] B区0809 ,数一英一,290 求调剂 +3 泠潍1111 2026-04-12 4/200 2026-04-13 20:35 by 学员JpLReM
[基金申请] 2026 WR青拔 +3 冬日阳光CAS 2026-04-09 6/300 2026-04-13 18:40 by liuchb715
[考研] 一志愿西交机械专硕求调剂 +9 求上岸的小王 2026-04-10 9/450 2026-04-13 16:08 by jiangguiquan11
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 270求调剂 +14 杨乐369 2026-04-11 14/700 2026-04-11 20:16 by 蓝云思雨
[考研] 283求调剂 +22 那个噜子 2026-04-09 22/1100 2026-04-11 10:41 by 逆水乘风
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 一志愿东北大学控制工程085406数二英二385,求调剂 +8 Ezra_Zhang 2026-04-09 8/400 2026-04-11 09:15 by 猪会飞
[考研] 346,工科0854求调剂,专硕 +7 moser233 2026-04-10 8/400 2026-04-11 08:52 by 猪会飞
[考研] 材料与化工调剂 +12 否极泰来2026 2026-04-10 13/650 2026-04-11 00:28 by wangjihu
[考研] 调剂 化学 307 +21 73372112 2026-04-09 23/1150 2026-04-10 23:53 by wj165256
[考研] 22408 366分,本科211,一志愿西工大 +4 Rubt 2026-04-09 4/200 2026-04-10 19:51 by chemisry
[考研] 085800 能源动力求调剂 +6 阿biu啊啊啊啊啊 2026-04-10 6/300 2026-04-10 15:03 by hemengdong
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 085601初试330分找调剂 +10 流心奶黄包l 2026-04-09 10/500 2026-04-10 08:14 by Sammy2
[考研] 已调剂 +18 柴郡猫_ 2026-04-09 19/950 2026-04-09 22:10 by 柴郡猫_
信息提示
请填处理意见