应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR产物再次PCR无条带 只有弥散
51/1返回列表
查看: 4571  |  回复: 18
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)

[求助] PCR产物再次PCR无条带 只有弥散

如图所示，左边是两道marker（DL2000和wide range），前四个样是一次PCR的产物，目的大小是3K，总见不着带。然后就把PCR产物稀释1000倍，进行再次PCR，就出现了大片段的弥散，就是图中后四个样。一开始以为稀释倍数不够，还试过10000倍和100000倍，结果类似，弥散稍微弱一些，但是集中的条带还是很大。求高人指点，这到底为啥啊？？？如何改进，才能获得清晰的单带啊？

20130227.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-03-01 12:31:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2013-03-01 12:52:56
试试提高退火温度，降低引物浓度，加入DMSO等方法。前两者或者能解决问题。

这就做上试试~谢！
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-01 21:06:54
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
试试提高退火温度，降低引物浓度，加入DMSO等方法。前两者或者能解决问题。
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-01 12:52:56
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

潇之天下

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
第一，检测PCR模板；第二，提高退火温度以增加特异性；第三，梯度稀释，同时设阴性和阳性对照。
赞一下 回复此楼
修行人
3楼2013-03-01 12:59:18
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Hopig

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 潇之天下 at 2013-03-01 12:59:18
第一，检测PCR模板；第二，提高退火温度以增加特异性；第三，梯度稀释，同时设阴性和阳性对照。

怎么检测PCR模板？您是指哪一步的模板啊？谢谢~
赞一下 回复此楼
5楼2013-03-01 21:07:34
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 19 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭