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关于实时荧光定量引物设计
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关于实时荧光定量引物设计，看有的资料说是要夸内含子，那我可不可以直接用CDS呢，或者一个外显子比较大，我在这个外显子里扩呢？ 另外，假如以上都木有好的结果，可不可以在该基因的3'非翻译区设计呢，如果不行的话，又是什么原因呢？ 跪求各路大侠帮忙释疑解难？  |
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 核酸生物学实验经验 | 实时定量PCR |
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cicelyzh
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ttxs992楼2013-01-21 10:12:00
3楼2013-01-21 12:27:46
cicelyzh
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【答案】应助回帖
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ttxs99: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢你的耐心回复~~~~ 2013-01-22 11:12:43
ttxs99: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢你的耐心回复~~~~ 2013-01-22 11:12:43
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做定量的反转录前RNA样品都需要进行DNase消化的。消化掉基因组DNA这一步是非常重要的。否则即使扩增片段不同，DNA模板扩增出来的产物也是会生成荧光的，会影响定量结果。而且DNA模板也会竞争引物。只是，如果扩增片段大小不同，熔解曲线中会形成不同的peak，很容易从PCR结果看出样品是否存在痕量基因组DNA。所以，如果为了省钱，可以不用在逆转录时做我前面提到的负对照。如果没有夸内含子的话，这个负对照是必需做的。 |
6楼2013-01-22 02:17:33
