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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 第一次pcr成功，同样的条件再P不出来了，求救？？？
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menghabai

新虫 (初入文坛)

[求助] 第一次pcr成功，同样的条件再P不出来了，求救？？？

各位大仙，我第一次pcr有条带了，想做克隆，于是把体系加倍成50微升，结果没有条带，我又把体系恢复成了原来的体系25微升，结果还是没有，没办法，我就把第一次pcr的产物进行稀释10  50  100  500  1000倍，再进行pcr，还是没有，请问，我该怎么办呢？？？
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1楼 2013-01-18 09:22:09
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
换体系的时候，你的模板都是一样的吗？这种情况我有时也会遇到，模板有没有降解的情况呢？可以再跑一次电泳验证一下。。。
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3楼2013-01-18 10:13:27
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先确定酶没有问题。有时候酶用着用着就不行了。试试换一管酶。此外，你P出结果的那次PCR的效率怎么样？如果产物浓度比较高25μl做克隆也没问题的。如果P出的条带不是很亮，应该是你还没有找到PCR的最适条件。你的原始模板是基因组DNA吗？
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2楼2013-01-18 09:45:21
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