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menghabai

新虫 (初入文坛)

[求助] 第一次pcr成功,同样的条件再P不出来了,求救???

各位大仙,我第一次pcr有条带了,想做克隆,于是把体系加倍成50微升,结果没有条带,我又把体系恢复成了原来的体系25微升,结果还是没有,没办法,我就把第一次pcr的产物进行稀释10  50  100  500  1000倍,再进行pcr,还是没有,请问,我该怎么办呢???
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先确定酶没有问题。有时候酶用着用着就不行了。试试换一管酶。此外,你P出结果的那次PCR的效率怎么样?如果产物浓度比较高25μl做克隆也没问题的。如果P出的条带不是很亮,应该是你还没有找到PCR的最适条件。你的原始模板是基因组DNA吗?
2楼2013-01-18 09:45:21
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piaoyunokok

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换体系的时候,你的模板都是一样的吗?这种情况我有时也会遇到,模板有没有降解的情况呢?可以再跑一次电泳验证一下。。。
3楼2013-01-18 10:13:27
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4楼2017-08-17 15:44:52
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5楼2017-08-17 21:40:29
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6楼2017-08-18 11:35:08
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7楼2017-08-18 12:47:36
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前行的璐

新虫 (小有名气)

换个引物试试
8楼2017-08-18 14:59:10
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9楼2017-08-18 21:28:03
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