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一休陈

金虫 (正式写手)

[求助] 麻烦各位虫友帮我分析分析这种酶切电泳图吧？我实在想不出为啥出现这个情况。

各位虫友，电泳图中泳道1是1kp lander MARKER.
                                泳道4是重组质粒
                               泳道2和3是目的基因片段与pUCm-T载体重组质粒，经我设计的BstXI 和 Xhol 两个酶切位点酶切以后的条带，理论是应该出现一个2700bp 和一个2300bp条带，电泳图上在2700和2300中间又多了一条(约2400或2500）。请大家帮我分析下中间那个多出的条带是什么情况呢？
        另外，关于Bst XI 酶切位点在T载体上是有两个，无论从哪一个bstxI 酶切，都只会多出20pb左右。不应该出现2400左右的条带啊！！


下面附件中有T载体的单克隆酶切位点 和重组质粒酶切位点图片。
捕获.PNG
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1楼 2013-01-05 16:12:43
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先用单酶切确定质粒大小正确，试试换其它酶做鉴定。
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3楼2013-01-06 02:11:29
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Arrennew

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多位点也应该是四条带，下面会不会有一条小带跑出去了？
分别用这两个酶单酶切看下结果大概就知道什么情况了。
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生命不息，探索不止。
2楼2013-01-05 16:25:35
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一休陈

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Arrennew at 2013-01-05 16:25:35
多位点也应该是四条带，下面会不会有一条小带跑出去了？
分别用这两个酶单酶切看下结果大概就知道什么情况了。

我分别进行了单酶切，并减少了酶切时间（两小时），仍然所有条带都消失。
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4楼2013-01-06 10:17:02
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一休陈

金虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-06 02:11:29
先用单酶切确定质粒大小正确，试试换其它酶做鉴定。

这俩酶单酶切也每条带。郁闷啊。我再换一个其他酶试试吧
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5楼2013-01-06 10:19:49
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