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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于rna反转录时的问题～～～紧急 ，希望高手指点
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guyue900905

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于rna反转录时的问题～～～紧急 ，希望高手指点

我从羊的肌肉组织提取出了rna，现在想把它转录成cdna，不知道反转录时rna的浓度，这个浓度是我自己摸索那？还是说有固定的组织的浓度？要是自己摸索，具体怎么摸索，在什么范围做浓度梯度？紧急 ，谢谢格外高手。
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1楼 2012-12-24 09:46:40
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guyue900905

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiangyubaoer at 2012-12-24 10:34:56
楼主抽完RNA后应该测了浓度了吧？我们做反转录时用的是10μl的体系，把RNA定到1μg。也就是说，假如你的RNA浓度为500ng/μl，做反转录的时候就加2μl的RNA。

我也测得 ， 大约为1000到2000ng/ul之间，你们这个量是根据说明书的来了是么？用的什么试剂盒呀？谢谢
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3楼2012-12-24 10:52:38
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-24 19:02:23
楼主抽完RNA后应该测了浓度了吧？我们做反转录时用的是10μl的体系，把RNA定到1μg。也就是说，假如你的RNA浓度为500ng/μl，做反转录的时候就加2μl的RNA。
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guyue900905
2楼2012-12-24 10:34:56
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xiangyubaoer

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-12-24 19:02:34
引用回帖:
3楼: Originally posted by guyue900905 at 2012-12-24 10:52:38
我也测得 ， 大约为1000到2000ng/ul之间，你们这个量是根据说明书的来了是么？用的什么试剂盒呀？谢谢...

我们用的是takara的盒子，编号DRR037S，http://www.takara.com.cn/?Plat=p ... =738&subclass=1，这是网址，上面有说明书，可以看看。我们的量貌似比说明书上的大，但做出来挺好的。
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4楼2012-12-24 11:11:52
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ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般反转录个1到5ug都可以 问题不大
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5楼2012-12-24 21:30:17
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