| 查看: 4397 | 回复: 12 | ||
shijunyu0618至尊木虫 (著名写手)
|
[求助]
WB条带周围黑黑的一团！！！！！
|
|
|
最近做ＷＢ，发现每次条带周围都有黑黑的一团，不知道是怎么回事。 请大虾指点！ 我用的一抗１:５０００和二抗１:２００００，都是ａｂｃａｍ的。 显色液是pierce，SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate。 ３％的ＢＳＡ封闭１．５小时。 一抗（用３％的ＢＳＡ配制）４度过夜 ＴＢＳＴ洗３次，每次２０分钟 孵二抗１．５小时 ＴＢＳＴ洗３次，每次２０分钟 显色  未命名.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
有多少人是今天查系统知道结果的？
已经有16人回复
-
系统查不到
已经有10人回复
-
基金不中，共勉
已经有3人回复
-
怎么查啊
已经有5人回复
-
范进中举一文的中心思想
已经有10人回复
-
我不理解！
已经有13人回复
-
2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战
已经有9人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有25人回复
-
2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？
已经有28人回复
-
能否退出参与的面上项目解除限项
已经有26人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- WB上样时样品往上漂溢出孔外，电泳后考马斯亮蓝染色条带特别浅几乎看不到。
已经有4人回复
- 蛋白浓度过低，无法做WB,如何进行蛋白浓缩？
已经有18人回复
- wb,一抗，二抗在25℃孵育可以嘛，看了资料有的说是室温，有的说是37℃。
已经有7人回复
- 关于WB的问题
已经有3人回复
- WB条带全出来了· ----各种条带··求分析
已经有12人回复
- WB三明治--滤纸大小问题
已经有18人回复
- WB显影结果分子量漂移
已经有16人回复
- SDS-Page电泳没有条带，都是黑黑的一片，请教原因
已经有9人回复
- wB检测磷酸化蛋白 阴性对照也有条带
已经有5人回复
- WB技术，条带弥散，拖尾，泳道很亮。
已经有3人回复
- wb，条带异常，拖尾，弥散。
已经有8人回复
- 做WB实验，关于抗体的选择？
已经有5人回复
- WB检测磷酸化蛋白
已经有41人回复
- WB 有内参 么有目得。why ?
已经有4人回复
- WB结果不理想，呼唤帮助
已经有20人回复
- WB蛋白定量
已经有7人回复
- 求助 原核表达WB 多条带
已经有11人回复
- 【求助/交流】wb时β-actin加完发光液不发光？
已经有4人回复
- 【求助/交流】立春红 WB 染色
已经有11人回复
- 【求助/交流】TBST配方会影响WB结果吗
已经有4人回复
- 【求助/交流】WB老做不出来
已经有6人回复
- 【求助/交流】请教一下，如果做通道蛋白的免疫荧光和WB选哪家的抗体最好
已经有5人回复
- 【求助/交流】小鼠单抗做WB的问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】WB电泳条带窄 但颜色深
已经有5人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-12-18 20:08:38
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-18 20:08:46
shijunyu0618: 金币+10, ★★★很有帮助, 今天把二抗浓度提高到了1:5万。情况类似，但是颜色笔之前的淡了。 2012-12-20 14:42:54
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-12-18 20:08:38
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-18 20:08:46
shijunyu0618: 金币+10, ★★★很有帮助, 今天把二抗浓度提高到了1:5万。情况类似，但是颜色笔之前的淡了。 2012-12-20 14:42:54
|
泳道内背景高，泳道外背景不高。不是封闭的原因，不是显影的原因，也不是漂洗不够，而是一抗或二抗的非特异性结合。 建议：减少一抗或二抗的作用时间，必要时降低浓度 蛋白上样量不要太高，最好不高于150 μg/孔 |
4楼2012-12-18 18:24:15
hallen6891
新虫 (小有名气)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 266
- 红花: 1
- 帖子: 97
- 在线: 34.8小时
- 虫号: 2154369
- 注册: 2012-11-29
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤生物治疗
2楼2012-12-18 17:14:29
1470776
金虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 1176.8
- 散金: 120
- 帖子: 70
- 在线: 119.7小时
- 虫号: 183637
- 注册: 2006-02-13
- 性别: MM
- 专业: 肿瘤发生
3楼2012-12-18 17:22:41
 |
5楼2012-12-18 19:09:39
mzhyan
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 712 (博后)
- 金币: 37461.7
- 红花: 24
- 帖子: 45756
- 在线: 287.3小时
- 虫号: 1191620
- 注册: 2011-01-18
- 专业: 环境污染化学
6楼2012-12-18 19:18:37
porphybaby
金虫 (正式写手)
- 应助: 89 (初中生)
- 金币: 948.3
- 散金: 16
- 红花: 6
- 帖子: 395
- 在线: 87小时
- 虫号: 1162143
- 注册: 2010-12-04
- 性别: GG
- 专业: 化学生物学与生物有机化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 分析得很透彻 2012-12-19 08:07:46
shijunyu0618: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-12-20 14:47:49
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+5, 分析得很透彻 2012-12-19 08:07:46
shijunyu0618: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-12-20 14:47:49
|
我反而觉得是你洗的时间太长了。 第一 建议用5%脱脂奶粉封闭，有条件的话封闭过夜，室温下至少封闭1小时。 第二 你 一抗二抗 稀释液应该都用 含脱脂奶粉的来配，这样可以降低背景。如果你一抗二抗的稀释液都仅是TBST，那你孵育那么长时间，一直摇动啊啥的，会不会把已经封闭的区域又过度洗涤了呢？然后又结合上去了呢？ 第三 这种现象我也遇到过，很可能是你一抗或二抗刚刚稀释之后，没有混均匀，然后就把膜放下去了。有的时候局部浓度特别大的时候，会造成严重的非特异性结合。 第四 洗膜不需要洗那么长时间的。一般洗3次，每次6~7分钟就可以了。敷完二抗之后洗3次，每次10分钟。 |
7楼2012-12-18 22:53:17
8楼2012-12-19 08:53:11
lidong.0107
铜虫 (小有名气)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 359
- 散金: 25
- 帖子: 84
- 在线: 77.6小时
- 虫号: 879140
- 注册: 2009-10-21
- 性别: MM
- 专业: 蛋白质组学
9楼2012-12-19 10:27:16
wenzonglu
木虫 (正式写手)
- 应助: 66 (初中生)
- 金币: 2327.1
- 散金: 19
- 红花: 1
- 帖子: 557
- 在线: 107.5小时
- 虫号: 421183
- 注册: 2007-07-14
- 专业: 抗肿瘤药物药理
10楼2012-12-20 10:35:55
