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铁杆木虫 (知名作家)

大头虫

【答案】应助回帖

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shijunyu0618: 金币+4, ★★★很有帮助 2012-12-20 14:48:07

用5%的脱脂奶粉（TBST配置），室温封闭2h，然后用TBST洗2次，TBS洗一次，每次5min左右，再用5%的脱脂奶粉配制一抗和二抗。一抗四度过夜，2抗2h。我觉得你主要的问题还是没有洗干净，显影时候别放太多的显影液，背景能好点。我一直在做wb，很折磨人。

11楼2012-12-20 11:13:26

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银虫 (小有名气)

毫无疑问，上样量太高，WB不宜用太多的目标蛋白，如图你的蛋白本身就是高表达，引起了污染。

12楼2012-12-25 12:27:29

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至尊木虫 (著名写手)

引用回帖:

12楼: Originally posted by mguo15 at 2012-12-25 12:27:29
毫无疑问，上样量太高，WB不宜用太多的目标蛋白，如图你的蛋白本身就是高表达，引起了污染。

上样量是每孔30微克，1mm，10孔的梳子，伯乐设备。BCA法测定的浓度哦。要上多少量合适？

13楼2012-12-26 08:54:03

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