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shijunyu0618

至尊木虫 (著名写手)

应助: 73 (初中生)
金币: 12011.2
红花: 3
帖子: 1314
在线: 973.8小时
虫号: 999195
注册: 2010-04-17
专业: 无机材料化学

[求助] WB条带周围黑黑的一团！！！！！

最近做ＷＢ，发现每次条带周围都有黑黑的一团，不知道是怎么回事。
请大虾指点！

我用的一抗１:５０００和二抗１:２００００，都是ａｂｃａｍ的。
显色液是pierce，SuperSignal West Pico Chemiluminescent Substrate。

３％的ＢＳＡ封闭１．５小时。
一抗（用３％的ＢＳＡ配制）４度过夜
ＴＢＳＴ洗３次，每次２０分钟
孵二抗１．５小时
ＴＢＳＴ洗３次，每次２０分钟
显色

未命名.jpg

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1楼2012-12-18 16:55:23

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lmsleeper

金虫 (小有名气)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 481.5
帖子: 198
在线: 76.5小时
虫号: 691760
注册: 2009-01-12
专业: 皮肤免疫性疾病

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 回帖置顶 2012-12-18 20:08:38
amisking: 金币+3, 鼓励积极发帖帮助解答问题。 2012-12-18 20:08:46
shijunyu0618: 金币+10, ★★★很有帮助, 今天把二抗浓度提高到了1:5万。情况类似，但是颜色笔之前的淡了。 2012-12-20 14:42:54

泳道内背景高，泳道外背景不高。不是封闭的原因，不是显影的原因，也不是漂洗不够，而是一抗或二抗的非特异性结合。
建议：减少一抗或二抗的作用时间，必要时降低浓度
蛋白上样量不要太高，最好不高于150 μg/孔