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gyesang

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【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
小丹木木: 金币+5, MolEPI+1, 积极应助,热心交流 2012-12-05 17:23:20
494750284: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2012-12-05 21:43:39
494750284: 金币+3, ★★★★★最佳答案, 重新做了一次,成功了。那个诡异的问题现在还是没搞明白。我十分肯定不是胶回收错了 2012-12-13 09:14:58
不知楼主你挑取了几个白色菌落,小提质粒的?
1. 如果楼主挑了很多的话,抽出来的质粒双酶切,目的片段都只有300多的话,那可能就是PCR切胶回收的问题了,是不是回收错了条带,因为根据楼主描述,似乎条带大小在PCR时是对的。
2. 如果只挑了一个或者两个白色菌落做质粒抽提双酶切,然后得到300多的条带,不能说明剩下的所有白色菌落都是阴性克隆,这时楼主可以做个菌落PCR筛选试试
3. 还有楼主确信两次PCR扩出来的条带大小都是符合预期的,按你的描述,说两次PCR,浓度都很低,感觉产物像是非特异性的产物,假如这非特异性条带中间有EcoRI或者BamHI的话,就正好把条带给切了到300bp

个人意见,仅供参考!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
2楼2012-12-05 15:39:09
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