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lmq613

金虫 (正式写手)

[交流] 克隆连接问题 已有4人参与

前面看到一位同学,在克隆出现问题,克隆出来的基因中间少一段,我也出现这种问题,PCR出来的片段大小是预测的大小,但连入克隆载体,要么不长斑,要么长出的斑,菌液PCR结果就比插入前少1000bp,测序也确实比目的基因少了中间的1000bp左右,请大家指教,谢谢!
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酶切专家

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可能是希望克隆的基因片段对E.coli有毒性,这在实际工作中很常见(尤其当你将基因克隆到某一种原核表达载体时)
2楼2012-10-23 20:52:36
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as023

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这我们实验室也遇见过,建议你核对一下你最近用的试剂有没有什么问题,比如胶回收试剂盒等等
3楼2012-10-23 20:56:36
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bb123456789

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到类似的问题了,最近在构建同一基因的原核表达载体和转基因载体,酶切连接后不长斑。请问大家回收的产物最多能放多久,对连接效率无影响?
坚持是一个过程,不是理所当然地抱怨和放弃
4楼2012-10-24 08:45:56
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diandong

禁虫 (著名写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
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5楼2012-10-24 11:17:07
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