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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆连接问题
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lmq613

金虫 (正式写手)

[交流] 克隆连接问题 已有4人参与

前面看到一位同学，在克隆出现问题，克隆出来的基因中间少一段，我也出现这种问题，PCR出来的片段大小是预测的大小，但连入克隆载体，要么不长斑，要么长出的斑，菌液PCR结果就比插入前少1000bp，测序也确实比目的基因少了中间的1000bp左右，请大家指教，谢谢！
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1楼 2012-10-23 15:44:36
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酶切专家

金虫 (小有名气)
★
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可能是希望克隆的基因片段对E.coli有毒性，这在实际工作中很常见（尤其当你将基因克隆到某一种原核表达载体时）
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2楼2012-10-23 20:52:36
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as023

银虫 (小有名气)
★
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这我们实验室也遇见过，建议你核对一下你最近用的试剂有没有什么问题，比如胶回收试剂盒等等
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3楼2012-10-23 20:56:36
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bb123456789

金虫 (正式写手)
★
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我也遇到类似的问题了，最近在构建同一基因的原核表达载体和转基因载体，酶切连接后不长斑。请问大家回收的产物最多能放多久，对连接效率无影响？
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坚持是一个过程，不是理所当然地抱怨和放弃
4楼2012-10-24 08:45:56
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diandong

禁虫 (著名写手)
★
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5楼2012-10-24 11:17:07
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