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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白纯化时目的蛋白没有洗脱下来
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xiao肖

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化时目的蛋白没有洗脱下来

各位老师，我现在有个蛋白PI值是5.3，分子量29000，我用DEAE纯化时，缓冲液是10mMPB，pH7.3,用60mMNaCl就可以洗脱下来了，因为实验原因，我现在想改用QFastFlow纯化该蛋白，缓冲液没变，同样的条件，我竟然用1MNaCl都洗不下来，Q填料是新买的，我没有预处理，这种情况会不会是死吸附了呢，如果是死吸附，我是不是用0.5MNaOH处理就可以了呢？
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1楼 2012-08-25 23:04:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流 常来 2012-08-31 17:29:52
引用回帖:
4楼: Originally posted by 生物-TJAB at 2012-08-26 23:30:17
强弱离子柱！不是因为结合力强弱划分的哦！是根据使用的PH范围划分的！可以用氢氧化钠洗柱子啊！
...

强阴和弱阴都可以在pH7.3时使用，虽说强弱的命名不是因吸附强度差异而来，但事实上是存在差异的。

我没说不能用氢氧化钠洗层析柱
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2012-08-27 00:22:57
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普通回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 专家出马，一个顶两 2012-08-26 04:06:27
虽说Q作为强阴，吸附能力比弱阴DEAE强，但0.06M和1M也差太多了吧。这很违反常理，只能再做一次，什么溶液都控制好，测好蛋白质回收率，说不定就不诡异了。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-08-26 01:09:59
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xiehe_ai

金虫 (著名写手)

额
2楼说的对，还是用NaOH处理下再重复实验吧
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夫天地者,万物之逆旅也；光阴者,百代之过客也。而浮生若梦，为欢几何？古人秉烛夜游，良有以也。况阳春召我以烟景，大块假我以文章。
3楼2012-08-26 18:49:05
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生物-TJAB

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
wizardfan: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流 2012-08-27 00:02:06
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-26 01:09:59
虽说Q作为强阴，吸附能力比弱阴DEAE强，但0.06M和1M也差太多了吧。这很违反常理，只能再做一次，什么溶液都控制好，测好蛋白质回收率，说不定就不诡异了。

强弱离子柱！不是因为结合力强弱划分的哦！是根据使用的PH范围划分的！可以用氢氧化钠洗柱子啊！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2012-08-26 23:30:17
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
你不用激动到连用4个感叹号
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
6楼2012-08-27 00:24:34
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先检测一下你的蛋白有没有挂上去吧。
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7楼2012-08-27 08:11:47
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bioleo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-31 17:30:06
0.5M NaOH洗，更换缓冲液再做。
谁让你用PB的！
强弱离子填料结合力是有不同，但强离子填料结合力一定比弱离子填料强吗？哈哈。
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8楼2012-08-28 09:41:52
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xiao肖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by bioleo at 2012-08-28 09:41:52
0.5M NaOH洗，更换缓冲液再做。
谁让你用PB的！
强弱离子填料结合力是有不同，但强离子填料结合力一定比弱离子填料强吗？哈哈。

老师，那您觉得什么缓冲液比较合适呢？谢谢
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9楼2012-08-29 11:18:17
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xiao肖

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by xiehe_ai at 2012-08-26 18:49:05
2楼说的对，还是用NaOH处理下再重复实验吧

恩，好的，谢谢
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10楼2012-08-29 11:19:19
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