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xiao肖

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白纯化时目的蛋白没有洗脱下来

各位老师,我现在有个蛋白PI值是5.3,分子量29000,我用DEAE纯化时,缓冲液是10mMPB,pH7.3,用60mMNaCl就可以洗脱下来了,因为实验原因,我现在想改用QFastFlow纯化该蛋白,缓冲液没变,同样的条件,我竟然用1MNaCl都洗不下来,Q填料是新买的,我没有预处理,这种情况会不会是死吸附了呢,如果是死吸附,我是不是用0.5MNaOH处理就可以了呢?
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bioleo

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-31 17:30:06
0.5M NaOH洗,更换缓冲液再做。
谁让你用PB的!
强弱离子填料结合力是有不同,但强离子填料结合力一定比弱离子填料强吗?哈哈。
8楼2012-08-28 09:41:52
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 专家出马,一个顶两 2012-08-26 04:06:27
虽说Q作为强阴,吸附能力比弱阴DEAE强,但0.06M和1M也差太多了吧。这很违反常理,只能再做一次,什么溶液都控制好,测好蛋白质回收率,说不定就不诡异了。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2012-08-26 01:09:59
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xiehe_ai

金虫 (著名写手)

2楼说的对,还是用NaOH处理下再重复实验吧
夫天地者,万物之逆旅也;光阴者,百代之过客也。而浮生若梦,为欢几何?古人秉烛夜游,良有以也。况阳春召我以烟景,大块假我以文章。
3楼2012-08-26 18:49:05
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生物-TJAB

新虫 (小有名气)

★ ★ ★
wizardfan: 金币+3, 鼓励新虫发帖交流 2012-08-27 00:02:06
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2012-08-26 01:09:59
虽说Q作为强阴,吸附能力比弱阴DEAE强,但0.06M和1M也差太多了吧。这很违反常理,只能再做一次,什么溶液都控制好,测好蛋白质回收率,说不定就不诡异了。

强弱离子柱!不是因为结合力强弱划分的哦!是根据使用的PH范围划分的!可以用氢氧化钠洗柱子啊!

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
4楼2012-08-26 23:30:17
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