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xiao肖

新虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
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帖子: 15
在线: 16.6小时
虫号: 1221529
注册: 2011-03-04
专业: 蛋白质组学

[求助] 蛋白纯化时目的蛋白没有洗脱下来

各位老师，我现在有个蛋白PI值是5.3，分子量29000，我用DEAE纯化时，缓冲液是10mMPB，pH7.3,用60mMNaCl就可以洗脱下来了，因为实验原因，我现在想改用QFastFlow纯化该蛋白，缓冲液没变，同样的条件，我竟然用1MNaCl都洗不下来，Q填料是新买的，我没有预处理，这种情况会不会是死吸附了呢，如果是死吸附，我是不是用0.5MNaOH处理就可以了呢？

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【求助/交流】SP柱子纯化蛋白，蛋白结合后，用2M NacL都没有洗脱下来，该怎么办？已经有5人回复

1楼 2012-08-25 23:04:05

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bioleo

金虫 (小有名气)

应助: 15 (小学生)
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专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
看天: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-31 17:30:06

0.5M NaOH洗，更换缓冲液再做。
谁让你用PB的！
强弱离子填料结合力是有不同，但强离子填料结合力一定比弱离子填料强吗？哈哈。

8楼2012-08-28 09:41:52

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bioleo

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专业: 环境微生物学

【答案】应助回帖

★ ★
看天: 金币+2, 鼓励交流常来 2012-08-31 17:30:23

DEAE弱阴，会与PO4-结合，影响蛋白与填料结合

11楼2012-08-31 16:02:49

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