应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 阳离子交换柱洗脱蛋白
91/1返回列表
查看: 2876  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

红虫梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 阳离子交换柱洗脱蛋白

我用阳离子柱纯化蛋白时，最高用5mol的Nacl都不能将全部蛋白洗脱下来。最后用1mol的NaOH洗的时候还有一个相对较大的峰。请问各位大虾，这到底是怎么回事。是不是离子强度不够、还是PH的问题。我们用了许多PH如：2.5、3.0、7.0、8、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11、11.5、12.0，但是还是没有将NaOH那个峰给洗脱下来。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2012-05-30 10:50:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看来是结合的太强了，当然和PH也有一定的关系
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-30 15:21:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

睿睿830716

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-30 20:14:09
一般要看你的蛋白的等电点是多少选择pH值，Nacl的浓度可以设梯度平衡时用0.1mol之后可以选择0.3 0.6 1.2mol的浓度，一般0.6 或1.2就可以洗脱下目的峰，你用1mol的NaOH洗的峰是目的条带吗，得结合电泳看纯化结果
赞一下 回复此楼
3楼2012-05-30 19:56:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 欢迎多多交流~ 2012-05-31 09:28:16
有些蛋白上柱之后变性了是洗不下来的，只能用NaOH或8M脲洗，再生柱子，还有些脂质上柱之后也洗不下来，需要用30%异丙醇洗柱再生。
赞一下 回复此楼
4楼2012-05-30 20:35:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先得确定NaoH洗脱下来的是不是你的目的蛋白，是不是变性了的蛋白，确认一下你的蛋白是否稳定先。
赞一下 回复此楼
6楼2012-06-01 12:42:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红虫梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-05-30 20:35:50
有些蛋白上柱之后变性了是洗不下来的，只能用NaOH或8M脲洗，再生柱子，还有些脂质上柱之后也洗不下来，需要用30%异丙醇洗柱再生。

我的蛋白是变性之后，再经过复性。我
赞一下 回复此楼
7楼2012-06-05 11:37:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-06-05 11:37:57
我的蛋白是变性之后，再经过复性。我...

经过变复性得到的蛋白，这种情况很常见的，虽然你复性到上清了，但蛋白折叠不一定是正确的，在离子柱上折叠不正确的蛋白很容易形成沉淀或者结合非常牢固。
当然即使正确折叠的蛋白，也会有这种情况，可以改变下填料介质的类型（不如低配基密度，弱交换剂CM、DEAE等）和pH，挂柱时pH尽量不要超过pI值的2个点。如果还是不行，可能这种蛋白不适宜用离子交换纯化，可以换其它方式纯化。
赞一下 回复此楼
8楼2012-06-05 21:00:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tomsonryan

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
坐问楼主是什么蛋白质？
赞一下 回复此楼
9楼2013-10-17 09:49:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
发芽豆LL5楼
2012-05-30 21:14   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 红虫梦 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭