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红虫梦

新虫 (初入文坛)

[交流] 阳离子交换柱洗脱蛋白

我用阳离子柱纯化蛋白时，最高用5mol的Nacl都不能将全部蛋白洗脱下来。最后用1mol的NaOH洗的时候还有一个相对较大的峰。请问各位大虾，这到底是怎么回事。是不是离子强度不够、还是PH的问题。我们用了许多PH如：2.5、3.0、7.0、8、8.5、9.0、9.5、10.0、10.5、11、11.5、12.0，但是还是没有将NaOH那个峰给洗脱下来。
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1楼2012-05-30 10:50:13
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看来是结合的太强了，当然和PH也有一定的关系
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2楼2012-05-30 15:21:38
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睿睿830716

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 鼓励交流 2012-05-30 20:14:09
一般要看你的蛋白的等电点是多少选择pH值，Nacl的浓度可以设梯度平衡时用0.1mol之后可以选择0.3 0.6 1.2mol的浓度，一般0.6 或1.2就可以洗脱下目的峰，你用1mol的NaOH洗的峰是目的条带吗，得结合电泳看纯化结果
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3楼2012-05-30 19:56:35
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西瓜: 金币+2, 欢迎多多交流~ 2012-05-31 09:28:16
有些蛋白上柱之后变性了是洗不下来的，只能用NaOH或8M脲洗，再生柱子，还有些脂质上柱之后也洗不下来，需要用30%异丙醇洗柱再生。
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4楼2012-05-30 20:35:50
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
首先得确定NaoH洗脱下来的是不是你的目的蛋白，是不是变性了的蛋白，确认一下你的蛋白是否稳定先。
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6楼2012-06-01 12:42:15
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红虫梦

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zxc6884 at 2012-05-30 20:35:50
有些蛋白上柱之后变性了是洗不下来的，只能用NaOH或8M脲洗，再生柱子，还有些脂质上柱之后也洗不下来，需要用30%异丙醇洗柱再生。

我的蛋白是变性之后，再经过复性。我
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7楼2012-06-05 11:37:57
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zxc6884

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by 红虫梦 at 2012-06-05 11:37:57
我的蛋白是变性之后，再经过复性。我...

经过变复性得到的蛋白，这种情况很常见的，虽然你复性到上清了，但蛋白折叠不一定是正确的，在离子柱上折叠不正确的蛋白很容易形成沉淀或者结合非常牢固。
当然即使正确折叠的蛋白，也会有这种情况，可以改变下填料介质的类型（不如低配基密度，弱交换剂CM、DEAE等）和pH，挂柱时pH尽量不要超过pI值的2个点。如果还是不行，可能这种蛋白不适宜用离子交换纯化，可以换其它方式纯化。
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8楼2012-06-05 21:00:19
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tomsonryan

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
坐问楼主是什么蛋白质？
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9楼2013-10-17 09:49:40
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发芽豆LL5楼
2012-05-30 21:14   回复  
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