| 查看: 5242 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
王艳xinwei银虫 (小有名气)
|
[求助]
转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~
|
|
| 各位虫友，我最近做了两批农杆菌转化，挑单菌落小摇后做菌液PCR，有目的条带，接着就开始大摇，大概20-30ml加2-3菌液，做了六瓶，一点都没长，没找到原因，接着我又挑了一次菌落，又小摇浑浊，做了菌液PCR，有目的条带，再继续大摇，还是一点都没长，很是让我悲伤，不知道问题出现在哪地方了。。。。。。我每次的培养基都是YEB，且加的抗生素都一致，不过我小摇后的菌是放在四度冰箱做完菌液PCR后大摇的，这有影响吗？找不到原因了，是感受态做的不好吗，还是其他的原因。。。。。。求帮助 |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有70人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 菌液pcr有带，扩大培养摇不起来
已经有11人回复
- 菌落PCR筛选
已经有17人回复
- 菌落PCR无条带
已经有19人回复
- 关于转化、菌落PCR
已经有8人回复
- 5'RACE 菌落PCR
已经有7人回复
- 请教各位前辈 为什么我做菌落PCR总也P不出来
已经有28人回复
- 连接转化后菌落PCR验证出现非特异性扩增
已经有5人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化PCR鉴定，没有阳性菌落
已经有5人回复
- 【求助/交流】菌落PCR结果（望高手进来拆招……本人第一次做TA克隆，么经验）
已经有11人回复
- 【求助/交流】菌落PCR扩出来的片段不是目的片段，咋办啊？？？？
已经有9人回复
- 【求助/交流】连接产物转化后菌落PCR正确，提取的质粒却比空质粒还小？
已经有4人回复
- 【求助/交流】菌落PCR求助
已经有23人回复
- 【求助/交流】菌落PCR问题
已经有23人回复
王艳xinwei
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 534.2
- 散金: 10
- 帖子: 202
- 在线: 155.5小时
- 虫号: 963946
- 注册: 2010-03-07
- 专业: 学前教育学
4楼2012-08-26 20:55:53
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-25 19:47:16
王艳xinwei: 金币+3 2012-09-13 12:49:09
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-25 19:47:16
王艳xinwei: 金币+3 2012-09-13 12:49:09
|
20-30ml加2-3（ul? ml?）。 个人觉得，你的做法有点问题。挑取单菌落后（可以用1.5ml离心管），用例如10ul水溶解稀释，取1ul作为模板做菌落PCR，剩余的9ul加入培养基及抗生素在PCR过程时就开始37度摇菌，等你的PCR完成后跑胶检测时，你的菌液浓度也差不多了。根据PCR结果选择需要扩大培养的菌，把这1管（可能你加LB是1ml开始）全部加到20ml培养基里，这样就容易获得你需要的了，而且时间也不会摇的太久。 你的做法是挑取后放在4度冰箱，这样，菌几乎不长，如果你又加了LB培养基（具体不知道你加了多少），如果你加的是1ML, 那么如果你只是吸取其中的一部分扩大培养，很有可能就没吸到或者量太少，因为你最开始的菌是溶解在这1ML培养基里的，或者你的菌还在培养基底部如果你开始加了LB后没有混匀的话。 |
3楼2012-08-25 14:57:08
lidonghong
金虫 (正式写手)
- 应助: 116 (高中生)
- 金币: 2071.8
- 散金: 21
- 红花: 2
- 帖子: 403
- 在线: 167.6小时
- 虫号: 1098160
- 注册: 2010-09-14
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2012-08-27 10:22:31
irenescbg
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 1
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 1673.8
- 散金: 93
- 红花: 1
- 帖子: 89
- 在线: 24.2小时
- 虫号: 1947397
- 注册: 2012-08-20
- 专业: 植物生理与生化
6楼2012-08-27 16:09:47
15