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王艳xinwei

银虫 (小有名气)

[求助] 转化后菌落pcr有目的条带,小摇长菌,再大摇不长了,求帮助~

各位虫友,我最近做了两批农杆菌转化,挑单菌落小摇后做菌液PCR,有目的条带,接着就开始大摇,大概20-30ml加2-3菌液,做了六瓶,一点都没长,没找到原因,接着我又挑了一次菌落,又小摇浑浊,做了菌液PCR,有目的条带,再继续大摇,还是一点都没长,很是让我悲伤,不知道问题出现在哪地方了。。。。。。我每次的培养基都是YEB,且加的抗生素都一致,不过我小摇后的菌是放在四度冰箱做完菌液PCR后大摇的,这有影响吗?找不到原因了,是感受态做的不好吗,还是其他的原因。。。。。。求帮助
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坚持就是胜利
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

接种量太少。。这个问题我师弟遇到过,那会刚开始做实验,50ml培养基接10ul种子 ,恁是一点没长。~~
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
12楼2012-08-29 17:13:41
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gjs713

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
王艳xinwei: 金币+3 2012-09-13 12:50:43
你按1%或者更大的接种量试试看。
勤奋、执着、专注,则无坚不破。
13楼2012-08-29 17:14:12
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