| 查看: 4965 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
王艳xinwei银虫 (小有名气)
|
[求助]
转化后菌落pcr有目的条带，小摇长菌，再大摇不长了，求帮助~
|
|
| 各位虫友，我最近做了两批农杆菌转化，挑单菌落小摇后做菌液PCR，有目的条带，接着就开始大摇，大概20-30ml加2-3菌液，做了六瓶，一点都没长，没找到原因，接着我又挑了一次菌落，又小摇浑浊，做了菌液PCR，有目的条带，再继续大摇，还是一点都没长，很是让我悲伤，不知道问题出现在哪地方了。。。。。。我每次的培养基都是YEB，且加的抗生素都一致，不过我小摇后的菌是放在四度冰箱做完菌液PCR后大摇的，这有影响吗？找不到原因了，是感受态做的不好吗，还是其他的原因。。。。。。求帮助 |
回复此楼» 猜你喜欢
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有185人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有0人回复
13楼2012-08-29 17:14:12
chenguestc
木虫 (职业作家)
- MolEPI: 7
- 应助: 576 (博士)
- 贵宾: 0.4
- 金币: 4526.9
- 散金: 1639
- 红花: 176
- 帖子: 4708
- 在线: 353.5小时
- 虫号: 1337860
- 注册: 2011-07-05
- 性别: GG
- 专业: 作物分子育种
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-25 19:47:16
王艳xinwei: 金币+3 2012-09-13 12:49:09
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励交流经验 2012-08-25 19:47:16
王艳xinwei: 金币+3 2012-09-13 12:49:09
|
20-30ml加2-3（ul? ml?）。 个人觉得，你的做法有点问题。挑取单菌落后（可以用1.5ml离心管），用例如10ul水溶解稀释，取1ul作为模板做菌落PCR，剩余的9ul加入培养基及抗生素在PCR过程时就开始37度摇菌，等你的PCR完成后跑胶检测时，你的菌液浓度也差不多了。根据PCR结果选择需要扩大培养的菌，把这1管（可能你加LB是1ml开始）全部加到20ml培养基里，这样就容易获得你需要的了，而且时间也不会摇的太久。 你的做法是挑取后放在4度冰箱，这样，菌几乎不长，如果你又加了LB培养基（具体不知道你加了多少），如果你加的是1ML, 那么如果你只是吸取其中的一部分扩大培养，很有可能就没吸到或者量太少，因为你最开始的菌是溶解在这1ML培养基里的，或者你的菌还在培养基底部如果你开始加了LB后没有混匀的话。 |
3楼2012-08-25 14:57:08
王艳xinwei
银虫 (小有名气)
- 应助: 2 (幼儿园)
- 金币: 534.2
- 散金: 10
- 帖子: 202
- 在线: 155.5小时
- 虫号: 963946
- 注册: 2010-03-07
- 专业: 学前教育学
4楼2012-08-26 20:55:53
lidonghong
金虫 (正式写手)
- 应助: 116 (高中生)
- 金币: 2071.8
- 散金: 21
- 红花: 2
- 帖子: 403
- 在线: 167.6小时
- 虫号: 1098160
- 注册: 2010-09-14
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
5楼2012-08-27 10:22:31
5