应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
51/1返回列表
查看: 1923  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

roy5513

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题

各位大神，我的蛋白加上组氨酸标签后理论大小约8.5KDa，经Ni亲和层析纯化后进行透析浓缩，之后跑蛋白电泳发现大小小于6KDa，这是怎么回事啊？两个蛋白都是这样。在进行蛋白水平之前工程菌的质粒都经过测序验证，插入片段的序列都正确。求大神指教啊！！！！！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

专业知识

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-08-22 08:32:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
roy5513: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-08-23 08:04:22
从你的图片看，我觉得是你跑胶有点问题，蛋白本身应该没多大关系，可以做下WB或质谱实验验证一下。。。。。。祝实验顺利
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-22 19:32:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
因为电泳是定性的分析，再者到小分子量时候，电泳会不准的。
最好的方法是质谱检测下。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-08-22 08:51:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-08-22 15:19:02
首先确定是蛋白没有挂上柱子都流穿了，还是蛋白没有被洗脱下来。原因可能有很多，比如组氨酸标签没有完全暴露或者丢失，或超声的功率太大，蛋白炭化，没有释放出来。可以在变性条件下用4M-6M盐酸胍进行纯化；若是洗脱有问题可以增加咪唑的梯度洗脱或加非离子去污剂（2%TritonX-100）至缓冲液中防止非特异性疏水作用。。。。。得自己慢慢摸索呀，祝实验顺利！能把图片发上来看看吗？
赞一下 回复此楼
3楼2012-08-22 09:06:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-22 15:19:10
想问下，你是跑的SDS-PAGE么？对于分子量小于15KD的，一般都介意跑tricine sds page，用小MARKER，虽然过程比较麻烦，但是看得稍微准确一点。
其次，跑胶看大小，其实也只能当做是一种大致的辨认手段，很多时候蛋白都会出现偏大或者偏小的情况，想要比较精确的知道，有条件的话，就最好去打个MS确认一下。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

roy5513
4楼2012-08-22 10:17:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 环境工程调剂 +9 大可digkids 2026-03-16 9/450 2026-03-20 17:38 by 醉在风里
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 8/400 2026-03-20 15:58 by babero
[考研] 271材料工程求调剂 +7 .6lL 2026-03-18 7/350 2026-03-20 09:10 by xingguangj
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +3 llllkkkhh 2026-03-18 3/150 2026-03-19 14:22 by houyaoxu
[考研] 328求调剂，英语六级551，有科研经历 +4 生物工程调剂 2026-03-16 12/600 2026-03-19 11:10 by 生物工程调剂
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 6/300 2026-03-18 22:55 by 204818@lcx
[考研] 330求调剂 +3 小材化本科 2026-03-18 3/150 2026-03-18 21:55 by 无懈可击111
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +8 小李0854 2026-03-16 8/400 2026-03-18 14:35 by 搏击518
[考研] 297求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-17 8/400 2026-03-18 14:30 by laoshidan
[考研] 312求调剂 +8 陌宸希 2026-03-16 9/450 2026-03-18 12:39 by Linda Hu
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[基金申请] 今年的国基金是打分制吗？ 50+3 zhanghaozhu 2026-03-14 3/150 2026-03-16 17:07 by 北京莱茵润色
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 085601材料工程315分求调剂 +3 yang_0104 2026-03-15 3/150 2026-03-15 10:58 by peike
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭