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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题
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roy5513

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位大神关于含组氨酸标签蛋白纯化的问题

各位大神，我的蛋白加上组氨酸标签后理论大小约8.5KDa，经Ni亲和层析纯化后进行透析浓缩，之后跑蛋白电泳发现大小小于6KDa，这是怎么回事啊？两个蛋白都是这样。在进行蛋白水平之前工程菌的质粒都经过测序验证，插入片段的序列都正确。求大神指教啊！！！！！！！
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1楼2012-08-22 08:32:20
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roy5513

新虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gelois at 2012-08-22 10:17:34
想问下，你是跑的SDS-PAGE么？对于分子量小于15KD的，一般都介意跑tricine sds page，用小MARKER，虽然过程比较麻烦，但是看得稍微准确一点。
其次，跑胶看大小，其实也只能当做是一种大致的辨认手段，很多时候蛋白 ...

是SDS-PAGE  没办法 只能去做质谱了  还有请教一下 是不是分子量小的蛋白在跑SDS-PAGE的时候容易发生弥散？
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5楼2012-08-22 14:32:36
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roy5513

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 王礼鹏 at 2012-08-22 09:06:47
首先确定是蛋白没有挂上柱子都流穿了，还是蛋白没有被洗脱下来。原因可能有很多，比如组氨酸标签没有完全暴露或者丢失，或超声的功率太大，蛋白炭化，没有释放出来。可以在变性条件下用4M-6M盐酸胍进行纯化；若是洗 ...

之前选择这个浓度的咪唑洗脱都没有问题，谢谢 看来最好的方法还是先去做个质谱分析看看了
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6楼2012-08-22 14:36:44
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