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酿酒酵母

铜虫 (初入文坛)

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专业: 微生物遗传学

[求助] 请大家帮忙看看我的蛋白电泳图，谢谢大家了已有2人参与

这是我的蛋白电泳图，最右边的为marker,目的条带在marker的第二条左右，左边的第二，第三，第四泳道为我的蛋白样品，大家看看我的这个目的条带是不是太细太淡了，这样的条带能做western blot吗？谢谢大家帮忙！

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1楼2012-08-18 11:05:33

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凌波丽

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专业: 生物大分子结构与功能
管辖: 生物科学综合

【答案】应助回帖

左边的第二，第三，第四泳道的样品带涂带太厉害了，还是改进一下吧。

SDS电泳带弥散和拖尾的原因和改进措施(凌波丽，2013-10-7)

1.原因一：上样量过多，应该减少上样量。对策：加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15μL（即2-10μg蛋白质）。如果样品很稀上样量可以达到100μL。
2.原因二：样品溶解不完全。
对策：
（1）样品应该充分溶解：保持各种蛋白质样品和Marker在上样前能够充分溶解，上样前最好离心一下，实在溶解不掉的颗粒就去掉。
(2)可以根据分子量标准的蛋白质试剂盒的要求加入样品溶解液；如果是自行配置标准和未知样品，按照0.5-1.0mg/L样品溶解液。溶解后，将其转移至Eppendorf管，盖上盖子（可以在盖子处加上卡子）后在110度沸水中水浴加热3分钟（可以在薄泡沫塑料板上钻出几个与Eppendorf管直径形同的圆洞，Eppendorf管放下去直到盖子边缘约束不能再往下为止，把薄泡沫塑料板的暴露出Eppendorf管的管体大部分的那一面放入沸水浴锅中，薄泡沫塑料板自然飘在沸水表面，便于取用和加热，也可避免沸水溅起。可以一批对于多个Eppendorf管进行不同时间的沸水浴。不要把Eppendorf管扔进沸水浴锅中，盖子可能会被冲开），而后在室温下冷却待用。如果较长时间不用，则将样品放入零下20度冰箱中储存，需用时在取出后使用前在110度沸水中加热3分钟室温冷却后再上样，以去掉样品蛋白质中的亚稳态聚合体。
（3）改变样品缓冲溶液使得样品能够充分溶解，SDS 用量要充分。

如此严重的样品带涂带，我不建议直接WB，WB灵敏度高，一抗、二抗质量好，肯定是有阳性反应，但是阳性反应的对应的蛋白质是什么？可能很难让人信服，即使能够区分开三条带的样品，但是三条带涂带如此，不可能让人接受三条带就是各自的单一样品。