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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 大家帮我看看我最近做的pcr电泳图
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wang@香

新虫 (初入文坛)

[求助] 大家帮我看看我最近做的pcr电泳图

我最近做了同科不同种植物的issr，下面是我pcr电泳图的结果，我想请问大家我的图为什么条带这么多，但是却不亮，而且弥散严重啊，最近做了很多引物，很多能扩增的引物做出来都是这样的效果，谢谢大家！

电泳图
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现世安稳，岁月静好
1楼 2012-08-18 08:29:59
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王贤卓

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wang@香: 金币+5, ★有帮助, 谢谢！ 2012-08-18 16:50:23
引物设计不合理吧，二聚体过多。退火温度低，延伸温度过长。酶浓度多多。。总之好多原因。你一个个去发现原因吧啊
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2楼2012-08-18 09:02:48
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wittyjc

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wang@香: 金币+5, ★有帮助 2012-08-18 16:50:32
个人感觉 酶量有点多，模板量也可以稍微降降。
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3楼2012-08-18 14:31:42
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xuyihui2001

银虫 (正式写手)
条带多是正常的呀。（ISSR(inter-simple sequence repeat)是Zietkeiwitcz等于1994年发展起来的一种微卫星基础上的分子标记。其基本原理是:用锚定的微卫星DNA为引物，即在SSR序列的3'端或5'端加上2-4个随机核苷酸，在PCR反应中，锚定引物可引起特定位点退火，导致与锚定引物互补的间隔不太大的重复序列间DNA片段进行PCR扩增。所扩增的inter SSR区域的多个条带通过聚丙烯酞胺凝胶电泳得以分辨，扩增谱带多为显性表现。 　　ISSR引物的开发不像SSR引物那样需测序获得SSR两侧的单拷贝序列，开发费用降低。与SSR标记相比，ISSR引物可以在不同的物种间通用，不像SSR标记一样具有较强的种特异性;与RAPD和RFLP相比，ISSR揭示的多态性较高，可获得几倍于RAPD的信息量，精确度几乎可与RFLP相媲美，检测非常方便，因而是一种非常有发展前途的分子标记。目前，ISSR标记已广泛应用于植物品种鉴定、遗传作图、基因定位、遗传多样性、进化及分子生态学研究中。
    只调高退火温度，最后一轮延伸时间长达10-20分钟，产物扩增完全就不会有弥散了。
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4楼2012-08-19 09:23:50
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wang@香

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by xuyihui2001 at 2012-08-19 09:23:50
条带多是正常的呀。（ISSR(inter-simple sequence repeat)是Zietkeiwitcz等于1994年发展起来的一种微卫星基础上的分子标记。其基本原理是:用锚定的微卫星DNA为引物，即在SSR序列的3'端或5'端加上2-4个随机核苷酸，在 ...

我想知道的是为什么我的条带有点宽，而不像mark那样条条分明的，清晰明朗的，不拖泥带水的，我看其他论文有些人做的图就很好看啊。有些条带过宽还使得邻近的条带连在一起，我做了好多引物都是这样的，还请大师们指点啊，我是刚刚接触issr分子实验的，所以有很多不懂的，这样的条带好像不太好读数啊。
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现世安稳，岁月静好
5楼2012-08-19 10:07:41
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