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Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 硫酸铵沉淀目的蛋白的疑惑

我需要测水稻IAA氧化酶活性。按参考文献做,有个步骤是用硫酸铵沉淀蛋白,不过文献中没有表示硫酸铵的浓度。后来我是加百分之100的硫酸铵固体沉淀的。不知道这样做对不对?
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日拱一卒,功不唐捐
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Crescendo: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢! 2012-06-25 18:53:05
我觉得吧,可能没必要用那么高的浓度,其实很多蛋白都有适合的浓度的,所以一般都是先取点样来做梯度,最终确定合适浓度的。
我们现在是配置60%的硫酸铵溶液,沉淀时候用蠕动泵滴加,至终浓度为30%,一般都是能够搞定的。
3楼2012-06-25 14:19:43
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
Crescendo: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-06-25 18:52:22
是对的。终浓度为饱和硫酸铵溶液的浓度。
何须剑道争锋?千人指,万人封,可问江湖鼎峰,三尺秋水尘不染,天下无双。
2楼2012-06-25 12:43:03
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
Crescendo: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-06-25 18:53:15
最好是走个梯度摸索一下,那样找出的最佳浓度获得的蛋白应该也最纯吧?
4楼2012-06-25 15:53:38
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)

看目的,纯化,摸梯度;只为检测,饱和
5楼2012-06-25 19:11:58
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