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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 硫酸铵沉淀目的蛋白的疑惑
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Crescendo

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 硫酸铵沉淀目的蛋白的疑惑

我需要测水稻IAA氧化酶活性。按参考文献做，有个步骤是用硫酸铵沉淀蛋白，不过文献中没有表示硫酸铵的浓度。后来我是加百分之100的硫酸铵固体沉淀的。不知道这样做对不对？
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日拱一卒，功不唐捐
1楼 2012-06-25 10:36:49
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hongqifei

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Crescendo: 金币+2, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-06-25 18:52:22
是对的。终浓度为饱和硫酸铵溶液的浓度。
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何须剑道争锋？千人指，万人封，可问江湖鼎峰，三尺秋水尘不染，天下无双。
2楼2012-06-25 12:43:03
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
Crescendo: 金币+2, ★★★★★最佳答案, 谢谢！ 2012-06-25 18:53:05
我觉得吧，可能没必要用那么高的浓度，其实很多蛋白都有适合的浓度的，所以一般都是先取点样来做梯度，最终确定合适浓度的。
我们现在是配置60%的硫酸铵溶液，沉淀时候用蠕动泵滴加，至终浓度为30%,一般都是能够搞定的。
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3楼2012-06-25 14:19:43
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kedaxiaoyu

木虫 (职业作家)

神虫浮云

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Crescendo: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2012-06-25 18:53:15
最好是走个梯度摸索一下，那样找出的最佳浓度获得的蛋白应该也最纯吧？
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4楼2012-06-25 15:53:38
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lzgxgz

至尊木虫 (正式写手)
看目的，纯化，摸梯度；只为检测，饱和
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5楼2012-06-25 19:11:58
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durian0314

金虫 (小有名气)
你可以从10%，20%一直到100%做个梯度，沉淀下来看看哪个区域内活性比较高，就选用这个硫酸铵的浓度好了，直接100%把所有的杂蛋白和目的蛋白就全都沉淀了，也达不到粗纯化的效果
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6楼2012-06-26 16:50:16
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