24小时热门版块排行榜    

查看: 2130  |  回复: 7
【悬赏金币】回答本帖问题,作者尹框笔记将赠送您 12 个金币

尹框笔记

木虫 (小有名气)

[求助] 从发酵液中提取胞外蛋白已有3人参与

1、目的是要从发酵液当中提取根霉表达的胞外蛋白,采用的是硫酸铵沉淀的方法,95%的饱和度:
按理说,硫酸铵在水中的溶解度很大的,虽说95%饱和度是比较高,但是慢慢溶解的话,最后还是会完全融掉的,但是这次到最后下面却还有好多没能溶解,难道说培养基中的配方对最后的硫酸铵沉淀有影响吗?
配方当中无机盐就是磷酸氢二钾和七水合硫酸镁,其他的都是有机物质,此疑问一;
2、还是在用95%饱和度的硫酸铵沉淀蛋白当中出现的问题:
在加入硫酸铵的过程中,发酵液中会出现一些粘粘的、棕色的东西,并且会粘在壁上,后来用手一摸就感觉是油脂类的东西,而且加硫酸铵到最后,这类物质会和蛋白质结合到一块,这样会减少蛋白量。而我要提取发酵液当中的胞外蛋白,所以全部的蛋白都要,所以大家有方法能去除这类油脂性物质吗?此疑问二;
3、采用硫酸铵沉淀时,不管转子转的怎么慢,硫酸铵每次加的怎么少,在发酵液的上面还是会出现一些白色的物质,师姐说这是蛋白变性了,那我应该怎么办才能避免出现这样的情况呢?还有如果这些是变性了的蛋白,硫酸铵加到最后还会复性吗?这对后续步骤会有多大的影响?此疑问三。
回复此楼

» 收录本帖的淘贴专辑推荐

生工检测理论与实务

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baoqie121314

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
采用阳离子柱子和亲和层析吧,用柱子针对对性高
2楼2014-04-04 11:59:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rudy668

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果只是实验室级别的话还可以试试乙醇或者丙酮沉淀啊;疏水层析也可以尝试下
每日一小步,人生一大步
3楼2014-04-09 12:48:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

尹框笔记

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by rudy668 at 2014-04-09 12:48:43
如果只是实验室级别的话还可以试试乙醇或者丙酮沉淀啊;疏水层析也可以尝试下

这样对蛋白会不会有影响?
4楼2014-04-10 08:50:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanghier

铁虫 (初入文坛)

楼主,我也遇到跟你很相似的问题了,请问你解决了嘛?还望楼主指点,不胜感激。
5楼2015-01-14 23:43:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qsxf

新虫 (初入文坛)

你是用的什么培养基发酵培养的呢?
6楼2015-05-20 16:33:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Pan_F

新虫 (初入文坛)

我也是提取胞外蛋白,同样遇到了脂类的物质,现在不知道该怎么处理········请问楼主解决了吗?
7楼2018-09-20 09:55:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shengyansuo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

1 培养基中无机盐的含量有多少?95%的硫酸铵考虑温度的影响了吗?
2 你的发酵液直接加的硫酸铵,透析过没有?发酵液中有没有某种东西跟硫酸铵反应
3 先弄明白什么是硫酸铵沉淀,发酵液里面加入硫酸铵不就是为了让蛋白进行硫酸铵沉淀,然后再复溶.
8楼2018-09-21 15:29:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 尹框笔记 的主题更新
不应助 确定回帖应助 (注意:应助才可能被奖励,但不允许灌水,必须填写15个字符以上)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 每到中夜,情难自抑 +33 sioc-sunj 2024-05-28 57/2850 2024-06-01 21:39 by chemhua
[教师之家] 研究生在毕业答辩时挂了,遗憾 +10 spacr2022 2024-05-27 13/650 2024-06-01 17:45 by keyaner23
[论文投稿] 没收到邮件 10+3 荣小撇 2024-05-31 7/350 2024-06-01 15:04 by arthas_007
[考博] 24or25材料专业申博 +4 农夫三拳有点痛 2024-05-30 11/550 2024-06-01 14:45 by Napoleonsky
[基金申请] B口人才项目 +9 WOWO159357 2024-05-29 19/950 2024-06-01 14:24 by linxuhuizj
[硕博家园] 实验室太吵闹,无法安静学习,怎么办? +6 utahh 2024-05-31 11/550 2024-06-01 13:27 by utahh
[基金申请] 数理的人才答辩通知发了吗 +7 yzy3327 2024-05-30 7/350 2024-06-01 09:15 by 撒哈拉西部
[考博] 申博求助?本硕双非一篇三区和四区去985工科非天坑专业有没有希望? +4 LYS1200 2024-05-29 6/300 2024-06-01 08:50 by 学术渣渣神
[考博] 导师不让硕转博,让我去国外读博,能理解吗? +11 萧山幽谷 2024-05-29 19/950 2024-05-31 21:32 by 萧山幽谷
[考博] 广东以理材料系碳点与功能材料课题组 — 2博士名额 / 科研助理 +4 小城夜很美 2024-05-27 11/550 2024-05-31 21:26 by 小城夜很美
[论文投稿] 审稿专家比较坚定的让补充实验,但实在没法补充实验,修回还有希望吗? (EPI+1) 3+3 qweasd12345 2024-05-29 6/300 2024-05-30 08:11 by qweasd12345
[有机交流] 液相纯度高,但产品析不太出来 10+4 cui19236 2024-05-27 9/450 2024-05-30 07:45 by yuanjijoy
[论文投稿] 《控制理论与应用》期刊收版面费吗? +4 ygj2015 2024-05-29 4/200 2024-05-30 06:59 by nono2009
[论文投稿] 真急着毕业,CPB主编终审17天了,邮件催稿了两次,就是一点动静没有 5+3 kkkk夏 2024-05-28 6/300 2024-05-29 11:18 by hitsdu
[论文投稿] 核心初审被拒,理由是“选题的意义不明确,文章写得不像是科技论文”,怎么改 5+3 工藤雷花樱 2024-05-27 8/400 2024-05-29 10:09 by topedit
[基金申请] 如果您是国自然评审专家 +3 丁香园账户 2024-05-28 3/150 2024-05-29 06:44 by gaohui8888
[基金申请] E05青基有几个评审 +4 KYXY123 2024-05-28 4/200 2024-05-28 19:25 by popt2t
[论文投稿] EI期刊审稿人邮箱问题 5+3 shier妈妈 2024-05-27 4/200 2024-05-28 14:53 by topedit
[有机交流] 奇怪的物质 100+4 桃桃PXS 2024-05-27 7/350 2024-05-28 10:22 by 091602
[硕博家园] 周日 +6 1加油哦棒 2024-05-26 9/450 2024-05-27 10:30 by hahamyid
信息提示
请填处理意见