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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 发酵液能直接上HPLC吗
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794378428

银虫 (小有名气)

[交流] 发酵液能直接上HPLC吗

请教一下，要测发酵液中的某一产物，可以直接上液相吗，还是要怎么处理一下。大家是怎么做的呢
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1楼 2011-11-02 10:32:16
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imyting

至尊木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
794378428(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3): 高手，谢谢回复哦~~~ 2011-11-02 12:11:29
zhang8826857(金币+2): 补两个金币，鼓励下新虫，呵呵 2011-11-02 15:19:13
不能，一般液相的管路都非常细，很容易堵的。不知楼主的产物在哪里？菌内还是菌外，包涵体还是可溶表达，处理方法虽然不同，但是大致就是提取有效成分，避免颗粒物。一般可通过离心除去……仅供参考
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2楼2011-11-02 10:47:04
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1029732992

木虫 (著名写手)
★
794378428(金币+1):谢谢参与
处理以后可以上的~
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3楼2011-11-02 11:33:37
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icebergwu

木虫之王 (文学泰斗)
★
794378428(金币+1):谢谢参与
当然不能了，我们都是先高速离心，再用膜过滤，才能用高效液相测样的！
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4楼2011-11-02 12:34:04
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Jireh

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
794378428(金币+1):谢谢参与
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫 2011-11-02 15:18:47
一般不可以。
胞外产物先离心取上清，如果你要测的物质含量较低，那么要先浓缩处理，如果用标曲检测的话，一般而言标样溶于什么溶剂，也会处理样品使其溶于该溶剂中，最后过滤膜，上HPLC。
我也才做HPLC不久，我在想，如果直接拿上清去做，会不会有很多干扰峰啊。
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5楼2011-11-02 15:07:15
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含笑天天

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
794378428(金币+1):谢谢参与
scelab(金币+3): 这个不错 2011-11-02 16:54:12
两步处理即可：
1、10000转左右，高速离心除杂。
2、0.22微米水系滤膜过滤除杂。
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6楼2011-11-02 16:50:57
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zhang8826857

铁杆木虫 (著名写手)
★
794378428(金币+1):谢谢参与
有的还需要萃取一下呢
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7楼2011-11-02 16:54:35
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阿静

金虫 (正式写手)
★
794378428(金币+1):谢谢参与
要过膜的啦，要不然柱子会堵的
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8楼2011-11-02 19:01:36
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645329775

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
794378428(金币+1):谢谢参与
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫，同意这个说法 2011-11-03 03:53:50
一般是先萃取一下，然后10000转左右离心除杂，在0.22或0.45微米水系滤膜过滤除杂。
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9楼2011-11-02 19:29:09
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qiaolinkun

银虫 (小有名气)
★
794378428(金币+1):谢谢参与
不能直接上柱 否则发酵液里的大颗粒物会堵住柱子的 先离心 再过膜
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10楼2011-11-02 19:39:36
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qinyongfeng

金虫 (初入文坛)
★
794378428(金币+1):谢谢参与
除离心、过膜处理后，用一定的缓冲液稀释较好
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11楼2011-11-02 20:25:32
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龙行天下lee

金虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-11-03 17:14:57
用微孔滤膜过滤后再进样
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12楼2011-11-02 23:50:41
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分子生物化学

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-11-03 17:14:53
不可能直接上HPLC，它很贵滴！你一定要先粗滤，在用0.22mm滤膜过滤，不然人家不会让你的样品上柱的。
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13楼2011-11-03 16:38:05
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ljwn2008

银虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-11-03 17:15:07
各位同学回答非常正确，不能直接上HPLC,需要精滤才行
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14楼2011-11-03 16:43:09
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dayuer_86

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by imyting at 2011-11-02 10:47:04:
不能，一般液相的管路都非常细，很容易堵的。不知楼主的产物在哪里？菌内还是菌外，包涵体还是可溶表达，处理方法虽然不同，但是大致就是提取有效成分，避免颗粒物。一般可通过离心除去……仅供参考

萃取 浓缩 使其容于配方合理的溶剂，选择流动相等条件同样很关键
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15楼2011-11-03 21:31:32
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ycj0746

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
12000RPM,10min,重复两次,然后再用0.22um有机系滤膜过滤.
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16楼2011-11-05 08:41:55
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kika8014

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
zhang8826857(金币+5): 鼓励新虫，金币好少啊 2011-11-06 18:58:01
当然不能，需要过滤除去颗粒物和菌体，然后还需要用滤膜过滤，因为发酵液成分比较复杂，可能无法很好的分出你的目标物，此时你应该先做一下萃取，初步提纯。
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17楼2011-11-05 09:41:07
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bidage880405

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
5楼: Originally posted by Jireh at 2011-11-02 15:07:15:
一般不可以。
胞外产物先离心取上清，如果你要测的物质含量较低，那么要先浓缩处理，如果用标曲检测的话，一般而言标样溶于什么溶剂，也会处理样品使其溶于该溶剂中，最后过滤膜，上HPLC。
我也才做HPLC不久，我 ...

我想问一下，HPLC的洗脱液一般用的高纯水，那制作发酵液的时候是不是也得用高纯水？
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18楼2011-12-17 10:50:17
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bidage880405

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 含笑天天 at 2011-11-02 16:50:57:
两步处理即可：
1、10000转左右，高速离心除杂。
2、0.22微米水系滤膜过滤除杂。

我想问一下，HPLC的流动相用水的话是高纯水，像发酵液这种样品，在制作发酵液时是不是也得用高纯水？还是只需要用色谱纯把自己需要的东西从发酵液中萃取出来就行？
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19楼2011-12-17 10:56:20
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xiayz1198

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by 含笑天天 at 2011-11-02 16:50:57:
两步处理即可：
1、10000转左右，高速离心除杂。
2、0.22微米水系滤膜过滤除杂。

我们实验室也是这么处理的，没问题。但处理的溶液别放太久，否则还会生长菌的。
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20楼2011-12-17 11:15:31
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xiayz1198

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by bidage880405 at 2011-12-17 10:56:20:
我想问一下，HPLC的流动相用水的话是高纯水，像发酵液这种样品，在制作发酵液时是不是也得用高纯水？还是只需要用色谱纯把自己需要的东西从发酵液中萃取出来就行？

一般谁水就行了，没必要用高纯水。
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21楼2011-12-17 11:16:13
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暧醉殇

捐助贵宾 (小有名气)
★ ★
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zhang8826857(金币+1): 鼓励交流 2011-12-17 13:57:36
一般不可以直接进HPLC，由于不知道发酵产物是什么，而且发酵液中的固体颗粒物的粒径可能比较大，会阻塞色谱柱，所以进柱前最好用有机相膜过滤几遍，以除去固体颗粒物及某些菌，还要考虑发酵液的pH值是否在色谱柱范围之内，不在色谱柱的范围内的话还要调节pH值，再进柱~~
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22楼2011-12-17 11:30:17
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慕枫寒

铁虫 (初入文坛)
1Wrpm 5min  ，0.22um过滤
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23楼2011-12-29 14:48:24
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hong_31

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
不能直接上液相，样品必须经过前处理之后才能上样。前处理包括离心，膜过滤，以及根据你的样品浓度选择浓缩或者稀释。
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24楼2011-12-29 16:58:42
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kellyfilm

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
微孔膜过滤处理就好了，
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25楼2012-02-01 09:55:42
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yugijiang

木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
发酵液很杂的，必须要先进行前处理，可以离心下先至于具体怎么处理得根据你的样品来了
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26楼2012-07-06 16:53:26
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celeryjhq

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用烘干，水浴之类的方法浓缩之后再离心过滤直接上机么？萃取的话，比方说用乙酸乙酯萃取，还需要用别的溶剂洗脱是为什么?
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27楼2014-03-21 11:07:08
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zhangxianqin

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
虽然时间隔了很久了，还是很想问一下楼主最后是怎么做的呢？谢谢~~
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28楼2014-09-25 17:32:26
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qdw54321

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
至少要先离心，过滤啥的
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29楼2015-07-04 11:24:56
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