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war3one

金虫 (著名写手)

[求助] 求助大家怎么用HPLC测发酵液乙醇含量

实验室没有气相，只有液相，C18色谱柱，求助大家怎么测发酵液乙醇含量，先谢谢各位了！
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1楼2011-07-27 10:56:11
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dryfish

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

若有视差折光检测器的话，是可以的。
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2楼2011-08-01 09:39:06
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war3one

金虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by dryfish at 2011-08-01 09:39:06:
若有视差折光检测器的话，是可以的。

有87H柱子 能具体说下条件吗？几分钟出峰？
谢谢了
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3楼2011-08-02 09:46:16
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yihuichai

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

war3one(金币+5): 谢谢了 2011-08-09 10:40:46
若有BIO-RAD HPX-87H的柱子，就在以下色谱条件检测吧：

流动相：5mMH2SO4
流速：0.6ml/min
柱温：63度
RID示差监测器
出峰时间：21min左右
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4楼2011-08-02 10:14:15
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jinbo7

铁杆木虫 (正式写手)

山寨王

【答案】应助回帖

war3one(金币+5): 谢谢了 2011-08-09 10:40:54
估计是不是视差折光检测器也是没有的吧？
没条件就采用滴定法测定乙醇吧，原理：首先是利用重铬酸钾氧化乙醇成为醋酸。3CH3CH2OH+2K2CrCO7+8H2SO4 →3CH3COOH+2Cr2(SO4)3+2K2SO4+11H2O ，氧化乙醇后剩余的重铬酸钾则与碘化钾作用， 生成游离的碘。 K2Cr2O7+6KI+7H2SO4 →4K2SO4+Cr2(SO4)3+7H2O+3I2 最后游离的碘再被硫代硫酸钠还原，2Na2S2O3+I2→ 2NaI+Na2S4O6 从而根据氧化乙醇所消耗的重铬酸钾量计算出乙醇含量。
参考检测方法：
试 剂 制 备 ： （1 ） 0. 1 N 标准重铬酸钾溶液： 精确称取重铬酸钾 4. 9g， 溶解后移入 1 000ml 容量瓶中， 稀释到刻度。 （2） 0. 1 N 硫代硫酸钠溶液： 称取硫代硫酸钠约 25 ， 溶解后移入1 000ml 容量瓶中， 稀释后定容至刻度。 （3） 硫代硫酸钠溶液的标定： 吸取标准重铬酸钾溶液20ml 于500ml 的三角瓶中， 用量筒加入浓硫酸5ml 及碘化钾 2g， 盖塞在暗处 放置 5min， 加水约 200ml， 用待标定的硫代硫酸钠溶液滴定， 当溶液由橙色为 止 。 从 硫 代 硫 酸 钠 的 用 量 计 算 出 浓 度 。 2 、 样 品 的 测 定 （1 ） 微量乙醇的提取： 称取样品适量，置烧瓶中， 连接冷凝器在瓶底加热蒸馏，收集蒸馏液于100ml 容量瓶中，达到刻度为止， 盖上瓶塞，混合均匀。 （2） 乙醇的氧化： 在200ml的三角瓶中放入0. 1 N 的重铬酸钾20ml， 用量筒取浓硫酸5ml， 缓缓地倒入， 然后滴入蒸馏液10ml， 并不断振荡， 连接冷凝管， 放在石棉网上加热回流， 使瓶中溶液轻微煮沸 10min。 （3） 游离碘的生成： 待回流过的溶液冷却后， 用水冲冷凝管， 使全部溶液无损地盛在200ml三角瓶中，然后小心地将溶液移入500ml三角瓶， 用水约 200ml 冲洗200ml 的三角瓶， 同时加入碘化钾1g , 盖塞，放置暗处5min 。 （4）滴定：自滴定管中滴入0.1N的硫代硫酸钠溶液，当溶液的颜色由橙色变成浅黄色时， 加淀粉溶液 5ml，继续滴定溶液由兰色变为绿色为止，记下消耗的硫化硫酸钠溶液的毫升数。0.0115—消耗1毫克当量的重铬酸钾所能氧化的乙醇克数
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5楼2011-08-02 10:41:15
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jenny静

新虫 (初入文坛)
滴定法的话，蒸馏是有一定误差的
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6楼2012-04-16 11:26:12
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zhymhbu

木虫 (正式写手)
建议可以买生物传感仪测定。速度很快。液相需要RID检测器
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微生物学-发酵工程-生化工程-生化与分子生物学-环境毒理学
7楼2012-09-10 19:44:07
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那纯洁的爱

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yihuichai at 2011-08-02 10:14:15
若有BIO-RAD HPX-87H的柱子，就在以下色谱条件检测吧：

流动相：5mMH2SO4
流速：0.6ml/min
柱温：63度
RID示差监测器
出峰时间：21min左右

请问发酵液具体要怎么样处理呢，是不是还要测定标准曲线
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8楼2014-06-07 11:38:05
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