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尹框笔记

木虫 (小有名气)

[求助] 从发酵液中提取胞外蛋白 已有3人参与

1、目的是要从发酵液当中提取根霉表达的胞外蛋白,采用的是硫酸铵沉淀的方法,95%的饱和度:
按理说,硫酸铵在水中的溶解度很大的,虽说95%饱和度是比较高,但是慢慢溶解的话,最后还是会完全融掉的,但是这次到最后下面却还有好多没能溶解,难道说培养基中的配方对最后的硫酸铵沉淀有影响吗?
配方当中无机盐就是磷酸氢二钾和七水合硫酸镁,其他的都是有机物质,此疑问一;
2、还是在用95%饱和度的硫酸铵沉淀蛋白当中出现的问题:
在加入硫酸铵的过程中,发酵液中会出现一些粘粘的、棕色的东西,并且会粘在壁上,后来用手一摸就感觉是油脂类的东西,而且加硫酸铵到最后,这类物质会和蛋白质结合到一块,这样会减少蛋白量。而我要提取发酵液当中的胞外蛋白,所以全部的蛋白都要,所以大家有方法能去除这类油脂性物质吗?此疑问二;
3、采用硫酸铵沉淀时,不管转子转的怎么慢,硫酸铵每次加的怎么少,在发酵液的上面还是会出现一些白色的物质,师姐说这是蛋白变性了,那我应该怎么办才能避免出现这样的情况呢?还有如果这些是变性了的蛋白,硫酸铵加到最后还会复性吗?这对后续步骤会有多大的影响?此疑问三。
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Pan_F

新虫 (初入文坛)

我也是提取胞外蛋白,同样遇到了脂类的物质,现在不知道该怎么处理········请问楼主解决了吗?
7楼2018-09-20 09:55:41
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查看全部 8 个回答

baoqie121314

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
采用阳离子柱子和亲和层析吧,用柱子针对对性高
2楼2014-04-04 11:59:11
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rudy668

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果只是实验室级别的话还可以试试乙醇或者丙酮沉淀啊;疏水层析也可以尝试下
每日一小步,人生一大步
3楼2014-04-09 12:48:43
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尹框笔记

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by rudy668 at 2014-04-09 12:48:43
如果只是实验室级别的话还可以试试乙醇或者丙酮沉淀啊;疏水层析也可以尝试下

这样对蛋白会不会有影响?
4楼2014-04-10 08:50:21
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