应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 工艺研究 » 蛋白质纯化
81/1返回列表
查看: 1143  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

[求助] 蛋白质纯化 已有4人参与

大家好，有几个问题向大家请教。
    我的蛋白是短肽13KD,大肠表达，纯化流程是SP-HIC-Desalting-Q，由于这个蛋白不稳定，SP结果当蛋白含量高于6mg/ml时4度放置两天就会出现浑浊，HIC由于使用的NaCl（硫酸铵会导致蛋白沉淀），不会出现沉淀，而由于要过Q柱出去内毒素和核酸，所以要脱盐，当浓度高于1mg/ml在20mM PB中就会沉淀，很是头疼。
   PS:1. 请问大家在这个实验流程中怎么不让它沉淀，
         2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么东西呢,尤其是脱盐过程，达到不沉淀的目的。
再次谢谢了，由于比较紧迫，请大家支支招吧。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2014-04-06 12:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zengxr

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:08
脱盐，你可以用纳滤膜试一试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-04-08 13:44:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingshi0703

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:20
leezz: 金币+6, ★有帮助 2014-04-10 16:40:47
我们做的是抗体脱盐，buffer中会加点EDTA。不知道和你的一样不~另外，我们做蛋白表达纯化，都保存在-80度，若浓度太大，在4度保存就容易沉降。
赞一下(1人) 回复此楼
停留在那年夏天的风~
3楼2014-04-08 16:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gfshksdl

新虫 (小有名气)
抗体脱盐
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

leezz
4楼2014-04-08 16:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gfshksdl at 2014-04-08 16:24:32
抗体脱盐

一种短肽，脱盐就沉淀
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-08 20:33:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xwb0411422

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:16:27
我们以前实验时可以再蛋白溶液里面加入0.1%的peg防治其高浓度凝聚，不知道对于你的蛋白是不是适用；而看你描述，你的蛋白好像不能离开NaCl环境，就算要上Q柱也并不需要完全除去NaCl啊，可以试下，在低浓度下（如0.05M NaCl或者0.1M NaCl）下会不会沉淀，如果可以，你可以脱盐，也可以直接稀释，一些浅见，希望能有帮助
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2014-04-17 20:17:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:47
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:15:43
这么不稳定，能做啥用。SP也能去内毒和核酸，干嘛还要Q。还有就是如果蛋白酸性稳定，可以在酸性过Q，直接流穿，让内毒和核酸吸附。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

leezz
7楼2014-04-17 22:49:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by heylixing at 2014-04-17 22:49:31
这么不稳定，能做啥用。SP也能去内毒和核酸，干嘛还要Q。还有就是如果蛋白酸性稳定，可以在酸性过Q，直接流穿，让内毒和核酸吸附。

本人越觉得这个蛋白未来前景不怎么地，目前来看太不稳定了，关键不是咱们投资做这东西，有人愿意出钱搞，也只好做下去了，谢谢了。
赞一下 回复此楼
8楼2014-04-23 13:19:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 leezz 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+3 babangida 2026-03-19 7/350 2026-03-20 14:13 by hejicker
[考研] 招收调剂硕士 +4 lidianxing 2026-03-19 12/600 2026-03-20 12:25 by lidianxing
[考研] 一志愿 南京航空航天大学大学 ，080500材料科学与工程学硕 +4 @taotao 2026-03-20 4/200 2026-03-20 10:37 by EBSD
[考研] 329求调剂 +6 想上学吖吖 2026-03-19 6/300 2026-03-20 09:00 by 每天只摆一小会
[考研] 材料专硕英一数二306 +6 z1z2z3879 2026-03-18 6/300 2026-03-20 08:49 by xingguangj
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +20 rare12345 2026-03-18 20/1000 2026-03-20 08:42 by 无际的草原
[考研] 320求调剂0856 +3 不想起名字112 2026-03-19 3/150 2026-03-19 22:53 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学调剂 ，六级已过，有科研经历 +12 曦熙兮 2026-03-15 12/600 2026-03-19 19:42 by maocaozhuxi
[考研] 一志愿天津大学化学工艺专业（081702）315分求调剂 +11 yangfz 2026-03-17 11/550 2026-03-19 15:06 by houyaoxu
[考研] 一志愿985，本科211，0817化学工程与技术319求调剂 +10 Liwangman 2026-03-15 10/500 2026-03-19 10:25 by 无际的草原
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +5 梨花珞晚风 2026-03-17 5/250 2026-03-18 14:49 by haxia
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 334求调剂 +3 志存高远意在机� 2026-03-16 3/150 2026-03-18 08:34 by lm4875102
[考研] 材料专硕326求调剂 +6 墨煜姒莘 2026-03-15 7/350 2026-03-17 17:10 by ruiyingmiao
[考研] 085601求调剂 +4 Du.11 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:08 by ruiyingmiao
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +4 ahbd 2026-03-14 4/200 2026-03-16 16:48 by 我的船我的海
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 5/250 2026-03-16 10:50 by 我可以上岸的对�
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭